布病病原学及血清学

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1、布病病原学及实验室诊断陕西省疾病预防控制中心陈宝宝123布氏菌的生物学特性布氏菌的抗原及毒力布病实验室检验主要内容1布鲁氏菌的生物学特性发现和分类位置31.1抵抗力31.3形态和培养特征1.21.1布氏菌的发现及分类布鲁氏菌病（Brucellosis）是由布鲁氏菌属（Brucella）的细菌侵入机体，引起的传染－变态反应性人畜共患传染病，简称布病。1887年英国军医Bruce首先从死于“马耳他热”的英国士兵的脾脏中分离出羊种布氏菌。微生物分类学家将布氏菌归为布鲁氏菌属，下分6个种19个生物型：羊种布氏菌（Bvr.melitensis）1，2，3型；牛种布氏菌（Br.abortus）1，2

2、，3，4，5，6，7，9型；猪种布氏菌（Br.suis）1，2，3，4，5型；沙林鼠种布氏菌（Br.neotemae）；绵羊附睾种布氏菌（Br.ovis）；犬种布氏菌（Br.canis）2013年，我省共分离出3株布鲁氏菌，均为羊3型；1991年以前流行优势种型为羊1、2型，1996年后则为羊1、3型。陕西省是以羊型菌为主，牛、犬种布鲁氏菌病的混合疫区，流行优势种随时间推移发生了变化。1.2形态和培养特征布氏菌属细菌是一组微小的球杆状革兰氏阴性菌，宽0.3～0.6µm，长0.6～1.5µm，可被所有的碱性染料所着色，吉姆萨染色成紫红色；无芽孢、无鞭毛、无质粒、不形成荚膜。一般说来，羊种菌

3、最小，牛种菌次之，猪种菌最大。鉴定布鲁氏菌的染色方法是：A:革兰氏染色B:复红染色C:亚甲蓝染色D:吉姆萨染色E:柯兹洛夫染色柯兹罗夫斯基提出用0.5%沙黄水溶液染色，加热至出现水泡，水洗后用0.5%孔雀绿或1%煌绿或1%亚甲兰水溶液复染1分钟，布氏菌染成红色，其他细菌染成绿色或蓝色。营养条件高，生长缓慢，生长所需温度为20-40℃，最适温度为37℃.通常要经过4-6天，有的甚至要经过20-30天（双相培养基）才能长出菌落。1.3抵抗力对物理因子的抵抗力对化学因子的抵抗力不同环境中的抵抗能力对抗生素的敏感性不同温度对布鲁氏菌影响对物理因子的抵抗力布鲁氏菌对消毒剂的抵抗能力对化学因子的抵抗

4、力不同环境中的抵抗能力现已证明，布鲁氏菌对四环素最敏感，其次是链霉素，而对枯草杆菌肽、多黏菌素B、多黏菌素M素等有很强的抵抗力。对抗生素的敏感性布氏菌的抗原、内毒素32.1布氏菌的毒力2.22布氏菌的抗原、毒力布氏菌的抗原成分十分复杂，存在A、M、G成分。A抗原对牛种布氏菌有特异性，M抗原对羊种布氏菌有特异性，G为两种菌共有。与多种细菌存在共同抗原，因而有血清交叉反应。布氏菌不产生外毒素，只产生内毒素，有致热、致炎作用，可导致休克。2.1布氏菌的抗原及内毒素从种上来说，羊种毒力最强，猪种和牛种次之，犬种的毒力很弱，几乎不引起人致病。由于菌种毒力等因素的不同，患病后的临床表现也不完全一样。

5、羊种布鲁氏菌患者中毒症状严重，多有典型的发烧、多汗、头痛、虚弱、关节痛、肝脾及睾丸肿大等急性症状。2.2布氏菌的毒力2.3布病发病过程细菌学检验33.1血清学检验3.23.布氏菌的实验室检验实验室要求：布氏菌是高致病性病原微生物，从危害程度来说为第二类病原微生物。布氏菌的分离培养要在生物安全二级以上实验室中进行。培养样品采集培养菌株鉴定种型鉴定细菌学检验33.13.1.1布氏菌培养检查材料：人或动物的全血动物流产胎儿（胎儿的肝脏、肺、胃内容物）动物脏器、动物胎盘、关节液、阴道分泌物等新鲜乳汁3.1.2双相血培养瓶采集对象：对急性期和慢性活动期病人未用药前进行血液采集。采样方法：1.使培养

6、瓶恢复至室温、编号；2.去掉培养瓶的保护帽，用酒精或碘消毒瓶塞；3.用注射器无菌静脉穿刺采集血液5mL，注入血培养瓶；4.再次消毒瓶塞和保护帽，盖好保护帽；5.从一侧到一侧倾斜培养瓶数次，混匀血液和肉汤。双相血培养瓶培养方法1.将瓶子水平放置用肉汤冲洗琼脂5-10分钟以接种琼脂；2.37℃直立培养。每隔一天观察一次结果，如未长菌，可通过冲洗再接种一次。30天未出菌，可定为阴性，其血培养瓶经高压灭菌处理；3.培养后观察肉汤和琼脂：出现下列一种或更多现象者为阳性结果：琼脂上：出现菌落或产生气体。肉汤中：出现浑浊、沉淀或溶血。3.1.3布氏菌培养特性生长缓慢，延滞期长，尤其初代分离需氧或微需氧

7、菌，PH7.2，牛种部分型别、绵羊附睾种布氏菌需在5-10%CO2环境中培养菌落无色透明，光滑圆形，突起，均质，直径1-2mm液体培养均匀混浊，无菌膜粗糙型菌落较大，生长快3.1.4分离培养基商用培养基：布氏琼脂布氏肉汤制备培养基：肝浸液琼脂血琼脂培养基半固体培养基胰蛋白眎琼脂培养基选择性培养基：抗菌素和染料选择性培养基杆菌肽放线菌酮制霉菌素布氏菌特异的油滴样菌落布氏琼脂布鲁氏菌菌落血平皿布氏菌菌落布氏菌革兰氏染色3.1.5布氏菌菌