黑素瘤抗原3基因及蛋白在非小细胞肺癌中的表达

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1、黑素瘤抗原3基因及蛋白在非小细胞肺癌中的表达【关键词】肺肿瘤；非小细胞肺癌；黑素瘤抗原3；免疫治疗【Abstract】ObjectiveTodeterminetheexpressionofmelanomaantigen3mRNAanditsencodingtumorantigeninnonsmallcelllungcancer(NSCLC)andtoexplorethepossibilityofusingthisantigenasavaccineforimmunotherapyinNSCLCpatients.MethodsTheexpressionofMAGE3mRNAa

2、ndproteinin3humanlungcancercelllinesand56NSCLCsamplestogetherallungsamplesinedbyRTPCRandfloetry(FCM).ResultsAll3humanlungcancercelllinesexpressedMAGE3mRNAandprotein.Ofthe56NSCLCsamples,30casesexpressedMAGE3mRNAand26casesexpressedMAGE3protein,butnoneoftheadjacentnormallungsamplesexpressedM

3、AGE3mRNAorprotein.ConclusionMAGE3mRNAandproteinareexpressedatahighfrequencyinNSCLCsamples,andthisantigenmaypossiblybethesuitabletargetforimmunotherapyinNSCLCpatients.【Keys,nonsmallcelllungcancer,melanomaantigen3,immunotherapy黑素瘤抗原3（MAGE3）基因是最初在恶性黑素瘤中发现的一种肿瘤抗原基因，其编码的抗原可以与人类白细胞抗原HLAA1结合，

4、被自体细胞毒T淋巴细胞（CTL）识别，使CTL产生特异性杀伤肿瘤细胞的效应［1］。目前研究表明，MAGE3基因在多种恶性肿瘤中均有表达，而在正常组织中，除睾丸和胎盘外，均无表达［2］。因此，作为一种CTL介导的肿瘤特异性免疫治疗的适宜靶抗原，该基因在肿瘤免疫治疗的研究中日益受到重视。本研究旨在检测MAGE3mRNA及蛋白在我国非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达情况，探讨以该抗原作为疫苗对NSCLC患者进行免疫治疗的可能性。1材料与方法1.1细胞系与标本以人髓性甲状腺癌细胞系TT作为阳性对照［1］，以小鼠成纤维细胞系3T3TK作为阴性对照。TT细胞、3T3TK和人肺癌细胞系SP

5、CA1、A549、A431购自上海中科院细胞库，上述细胞系均贴壁生长于含10%小牛血清的RPMI1640完全培养液中。56例NSCLC和相邻正常肺组织标本取自我院胸心外科的手术病例，其中男32例，女24例，年龄30～77岁，平均65.4岁；术后病理证实为鳞状细胞癌29例，腺癌25例，大细胞癌2例。1.2总RNA抽提培养细胞每(5～10)×106个加入1mlTrizol裂解液；将标本组织剪碎放入匀浆器中，每50mg加入1mlTrizol，彻底匀浆。将上述培养细胞和标本组织的裂解物移入1.5mlEppendorf管中，室温放置5min，加入200μl氯仿，振荡混匀，室温静置5mi

6、n；1.3×104r/min，4℃离心15min，将上层水相转移到干净的1.5mlEppendorf管中，加入等体积的异丙醇，混匀后室温放置10min；1.3×104r/min，4℃离心10min，弃上清，加入1ml75%乙醇，1.3×104r/min，4℃离心10min，弃上清，将沉淀置于室温干燥10min，用DEPC处理水溶解，分光光度计定量。1.3逆转录合成cDNA第1链及PCR反应按AMV逆转录酶(Promega公司)说明书配制逆转录反应体系，取2μg总RNA，加入3μlAMV逆转录酶，配成终体积为25μl的反应体系，将该体系置于42℃孵育60min，94℃5min灭活酶

7、，贮存于-20℃待扩增。MAGE3基因和内对照βactin的扩增引物由中科院生化所合成，序列分别为，MAGE3基因［3］：上游：5’TGGAGGACCAGAGGCCCCC3’，下游：5’GGACGATFATCAGGAGGCCTGC3’。βactin：上游：5ATCATGTCGGAGACCTACAACACCCCAGCC3。下游：5AAGAGAGCCTCGGGGCATCGGAACCGCTCA3。PCR反应体系的配制及反应条件详见3讨论MAGE基因编码蛋白可在体内诱导特