核因子nfκb对帕金森病mptp模型小鼠黑质cox2表

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1、核因子NFκB对帕金森病MPTP模型小鼠黑质COX2表【】目的:研究核因子（nfκb）在1甲基4苯基1,2,3,6四氢吡啶(mptp)所致小鼠帕金森病(pd)模型中的影响和对环氧合酶2(cox2)的表达调控作用以及人参皂甙rg1对其的影响，探讨导致多巴胺(da)能神经元变性失活的可能机制.方法:采用mptp制备亚急性pd小鼠模型,用免疫组织化学法和免疫蛋白印迹法观察小鼠黑质区酪氨酸羟化酶(th),cox2，前列腺素e2（prostaglandine2，pge2）以及nfκb的表达变化；并观察给予人参皂甙rg1对上述变化的影响.结果:与对照组

2、小鼠相比,模型组小鼠出现典型pd症状,在mptp第5次注射后24h，黑质区nfκb（34.6±5.6），cox2（28.2±5.1）,pge2(36.1±4.2)阳性细胞较对照组nfκb（2.5±0.8），cox2（1.0±0.3）,pge2(3.2±0.4)阳性细胞显著增加(p0.01),th阳性神经元显著丢失60%(p0.01)；经人参皂甙rg1处理后,模型组小鼠pd症状减轻,与模型组比较,黑质区nfκb（4.9±2.1），cox2（1.9±0.7）,pge2(4.6±0.3)阳性细胞明显减少(p0.01)，th阳性细胞数较对照组仅下降32%.结论

3、:核因子nfκb在亚急性pd模型早期对黑质cox2表达中可能起重要调控作用；人参皂甙rg1可能影响nfκb及c0x2表达而对小鼠多巴胺神经元起一定保护作用.【关键词】帕金森病；炎症；环氧合酶2；前列腺素e2；核因子nfκb；人参皂甙rg10引言帕金森病(parkinsonsdisease，pd)是一种常见的中枢神经系统变性疾病.有研究［1］认为,炎症可能在pd发病过程中起重要作用,环氧合酶2(cyclooxygenase2，cox2)及其介导的炎症反应可能参与pd发病过程［2］.核因子(nuclearfactorκappab,nfκb)在炎

4、症反应过程中发挥重要作用，近期的研究显示nfκb的激活与pd发病有关［3］.但有关nfκb是否参与pd模型中cox2表达调控的报道少见.本研究采用1甲基4苯基1,2,3,6四氢吡啶（1methyl4phenyl1,2,3,6tetrahydropyridine,mptp）制备亚急性pd模型,观察模型动物中脑黑质nfκb和cox2及其产物前列腺素e2（prostaglandine2，pge2）表达与小鼠黑质区酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase，th)阳性神经元数量关系及给予人参皂甙rg1后对上述变化的影响,探讨nfκ

5、b在pd发病过程中的分子机制，为探索pd有效防治措施提供线索.1材料和方法1.1材料健康雄性c57bl/6n小鼠45只，8~12ptp(美国sigma公司)；兔抗人pge2mab(美国cayman公司)；小鼠抗人thmab(美国chemicon公司)；人参皂甙rg1（吉林大学基础医学院化学教研中心）；兔抗人cox2mab,兔抗人nfκb（p50）多克隆抗体,浓缩型免疫组织化学超敏ultrasensitivetmsp试剂盒(福州迈新生物).1.2方法1.2.1动物分组和模型制备实验随机将小鼠分为3组，每组15只.模型组(pd组)：给予mptp30mg/kg,盐水

6、溶，腹腔注射,1次/d,连续5d.人参皂甙rg1干预组(rg1组)：除给予pd组相同的mptp处理外,mptp注射前3d定时给予人参皂甙rg110mg/kg,盐水溶，腹腔注射，并在mptp注射前2h注射人参皂甙rg1.溶剂组（对照组）：注射与pd组和rg1组等体积的盐水.上述动物均于mptp第5次注射后24h处死.于每次注射药物后观察小鼠是否出现静止震颤、肌肉僵直、运动迟缓等pd行为学表现,判断pd鼠模型是否成功.1.2.2免疫组织化学检测小鼠麻醉后,行40g/l多聚甲醛磷酸盐缓冲液常规灌注固定,迅速开颅取脑,40g/l多聚甲醛固定48h(4℃)后,石蜡包埋切片.

7、实验时取脑组织切片常规脱蜡至水后,用tbst(ph7.4±0.2)洗涤；组织抗原行水浴法热修复；30ml/l过氧化氢阻断内源过氧化物酶,正常非免疫动物血清室温孵育10min；同一组织相邻切片分别加入一抗即兔抗人cox2mab(1∶100)、兔抗人pge2mab（1∶300）、兔抗人nfκb（p50）多克隆抗体（1∶100）、小鼠抗人thmab(1∶400),4℃过夜；tbst洗涤后,加入生物素标记第二抗体室温孵育；tbst洗涤,加入链霉素抗生物素蛋白过氧化酶室温孵育20min,dab显色,中性树胶封固,光镜下观察照相.1.2.3in后,12000g4℃离心1

8、5min,