宋传旺医学免疫学ch22 免疫学检测技术的基本原理课件

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1、45—CAI课件1（MedicalImmunology)免疫学教研室医学免疫学2第二十二章免疫学检测技术的基本原理P2293免疫学检测技术：运用免疫学原理设计的检测方法可用于：诊断免疫相关性疾病探讨发病机制监测病情和治疗效果4第一节抗原或抗体的检测抗原抗体的检测方法用已知Ag检测未知Ab(?)用已知Ab检测未知Ag(?)5一、抗原抗体反应的特点：（一）特异性：Ag（表位）与Ab(CDR)的结合可逆性：非共价键结合可见性：Ab与Ag的比例合适形成肉眼可见聚合物。阶段性：特异性结合阶段：几秒~几分钟可见反应阶段

2、：几分钟~几小时~几十小时6二、影响抗原抗体反应的主要因素：Ag与Ab的浓度、比例电解质:0.85%NaCl温度:370C酸碱度:pH=6-8Ag浓度Ag–Ab复合物前带后带等价带7抗原与抗体的种类：抗原的类型：颗粒性抗原：细胞，细菌，人工微球/珠可溶性抗原：细胞成分，蛋白分子，小分子化合物三、抗原或抗体的检测方法8抗体的类型：多克隆抗体(抗血清):识别多个表位，特异性差单克隆抗体：识别单个表位，特异性好抗-抗体（二抗）：抗异种Ig的抗体9三、抗原或抗体的检测方法（一）凝集反应：颗粒性抗原（或可溶性抗原吸附在

3、与免疫无关的载体上）与相应抗体在适当条件下形成肉眼可见的凝集小块。101、直接凝集反应：天然颗粒性抗原（细菌或细胞）与相应抗体直接结合所出现的凝集现象：（1）玻片法—定性试验：已知Ab未知Ag(?)ABO血型鉴定，细菌种属抗原型别的鉴定+11（2）试管法—半定量试验：诊断伤寒副伤寒的“肥达氏反应”病人血清倍比稀释伤寒细菌悬液1:21:41:81:161:321:64对照122、间接凝集反应：++—载体：红血球：间接血凝试验乳胶颗粒：间接乳胶凝集试验133、间接凝集抑制试验：++乳胶妊娠试验尿液标本（HCG？

4、）抗HCG抗体HCG致敏乳胶不凝集结果判定凝集阳性阴性14（二）沉淀反应(precipitation)：可溶性性抗原与相应抗体直接结合，在适当条件下形成肉眼可见的沉淀现象（沉淀线）。1、单向免疫扩散可定量检测Ag。15含抗人IgG琼脂制成平板待测血样(IgG浓度?)标准人IgG不同浓度制作标准曲线待测样品结果162、双向免疫扩散(doubleimmunodiffusion)：----定性检测Ag或Ab；Ab效价滴定AgAb扩散AgAb扩散1:21:41:81:161:241:641718３、免疫电泳（immu

5、noelectrophoresis)+标本先电泳**************************两侧挖槽加Ab孵育后出现肉眼可见沉淀-1920（四）免疫标记技术－用标记抗体或抗原进行抗原抗体反应：利用荧光素、酶、放射性同位素以及胶体金标记抗体，以检测相应抗原的技术1、免疫荧光技术（immunofluorescencetechniques）利用荧光素标记抗体或抗抗体以检测细胞表面或细胞内抗原的技术。211、免疫荧光技术（immunofluorescencetechniques）直接法间接法22间接免疫荧光检

6、测自身抗核抗体23用酶标记Ab(或Ag)与标本中的Ag(或Ab)发生特异性结合加入酶的底物，在酶作用下产生有色物质根据颜色可作出判断或测量光密度值免疫酶标技术：酶联免疫吸附试验（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）2、免疫酶标技术：24（1）双抗体夹心法：+++25（2）间接法+++26273、放射免疫测定（radioimmunoassay，RIA）：利用放射性同位素标记技术检测抗原的技术灵敏度高，用于检测激素等血清中微量物质284.免疫胶体金标记技术(immunolog

7、iccolloidalgoldsignature，ICS)胶体金颗粒表面带有较多电荷，用胶体金颗粒标记抗体，检测组织或细胞标本中的抗原。29常用方法：胶体金斑点渗滤试验胶体金斑点免疫层析试验BDCTA30第二节免疫细胞测定一、免疫细胞的分离外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC)包括淋巴细胞和单核细胞。红细胞密度：为1.093左右，多核白细胞密度：为1.092左右，淋巴细胞和单核细胞密度：1.075～1.090，血小板密度：1.030～1.035。31方法：密

8、度梯度离心法分离液：聚蔗糖泛影葡胺（比重：1.077±0.001）稀释全血分离液RBC粒细胞PBMC稀释血浆（一）外周血单个核细胞（PBMC）的分离：32（二）淋巴细胞的纯化：贴壁法——去除单核细胞（三）免疫磁珠分离法：（四）FACS分离法：33二、T细胞数量检测：1、E花环试验：原理：T细胞均有CD2分子，而B细胞无;将SRBC与人外周血淋巴细胞混合;SRBC可结合于T细胞周围形成花环细胞。34三