肝癌细胞hepg2与肝癌患者树突状细胞融合瘤苗的体外效应

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1、肝癌细胞HepG2与肝癌患者树突状细胞融合瘤苗的体外效应　张红梅，张利旺，刘文超，潘伯荣，斯晓明，任军【关键词】细胞融合EffectofavaccinepreparedbyfusionofHepG2cellspatientsainvitro　　【Abstract】AIM:Toinvestigatethefusionabilityofhepatocellularcarcinoma(HCC)patientderiveddendriticcells(DCs)phocytestoelicitspecificimmunityagainstHCCinvitro.M

2、ETHODS:Peripheralbloodmononuclearcells(PBMCs)fromHCCpatientsangranulocyte/macrophageclonestimulatingfactor(rhGMCSF)andinterleukin4(rhIL4),PBMCsoleculesetry.ThefusioncellsofDCsulatetheproliferationofautologousTlymphocytesphocytes(CTLs)olecules,includingCD8390.4%,CD8087.7%,CD8684.

3、4%andHLADR98.5%.ThefusioncellshadaremarkablygreaterabilitytostimulatetheproliferationofautologousTlymphocytesinparisonHCCpatientsulateautologousTlymphocytestoelicitspecificantitumorimmunityagainstHCCandmayserveasapromisingvaccineforimmunotherapyofHCC.　　【Keya,hepatocellular;immun

4、otherapy　　【摘要】目的：将肝细胞癌（HCC）患者树突状细胞(DCs)与肝癌细胞HepG2融合制备瘤苗，检测其体外诱导同源T细胞产生特异性抗HepG2的免疫效应.方法：以血细胞分离机分离富集HCC患者外周血单个核细胞（PBMCs），应用重组人粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(rhGMCSF)、白细胞介素4(rhlL4)体外诱导培养DCs；聚乙二醇融合DCs与肝癌细胞HepG2,MTT法测定融合细胞(DCs/HepG2)刺激同源T淋巴细胞增殖分化能力，细胞毒性实验检测DCs／HepG2诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对HepG2的特异性杀伤作用.结果

5、：融合细胞DCs/HepG2高表达成熟DC表面分子，其中CD8390.4%,CD8087.7%,CD8684.4%,HLADR98.5%；其刺激同源T淋巴细胞增殖的能力显著高于HepG2和DCs；DCs/HepG2活化的CTL对HepG2具有显著杀伤作用，其杀伤率为(63.5±4.6)%（效靶比例为20∶1）.结论：HCC患者外周血DC融合HepG2细胞可有效诱导同源T淋巴细胞产生特异性抗HCC免疫效应，可能成为HCC免疫治疗的有效途径.　　【关键词】树突细胞；细胞融合；癌，肝细胞；免疫疗法　　　0引言　　肝细胞癌（hepatocellularcarc

6、inoma,HCC）因缺乏特异性肿瘤抗原且抗原性弱，其生物治疗相对困难.树突状细胞(dendriticcells,DCs)是体内功能最强的专职抗原提呈细胞，可摄取、加工处理和提呈抗原，并有效激活T细胞产生抗原特异性免疫应答〔1〕.将DC与肝癌细胞融合，理论上可实现DC对肝癌细胞抗原最充分的提呈，有望获得令人满意的肝癌生物治疗效果.我们利用细胞融合技术将DC与肝癌细胞融合，制备融合细胞疫苗，探讨其生物学特性及抗肿瘤活性，为肝癌DC疫苗临床应用提供实验基础及相关资料.　　1材料和方法　　1.1材料　　RPMI1640培养液、T细胞尼龙毛柱购自美国Gibco

7、公司；Xvivo15无血清培养液购自美国CambrexBioscience公司；淋巴细胞分离液、细胞膜荧光染料PKH26，PKH67，500g/L聚乙二醇(polyethyleneglycol，PEG)为美国Sigma公司产品；重组人GMCSF，IL4为美国PeproTech公司产品；新型重组人肿瘤坏死因子nrhTNF购自第四军医大学生物技术中心；ELISA检测试剂盒购自美国RD公司；抗人FITCCD80,HLADRmAb与抗人PECD86,CD83mAb均为美国BDPharMingen公司产品.　　1.2方法　　以血细胞分离机分离富集HCC患者外周血

8、单个核细胞（PBMCs），淋巴细胞分离液密度梯度离心纯化，无血清Xvivo15培养液重悬细胞，