肝癌细胞hepg2与肝癌患者树突状细胞融合瘤苗的体外效应

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1、肝癌细胞HepG2与肝癌患者树突状细胞融合瘤苗的体外效应作者: 张红梅,张利旺,刘文超,潘伯荣,斯晓明,任军【关键词】细胞融合EffectofavaccinepreparedbyfusionofHepG2cellspatientsainvitro  【Abstract】AIM:Toinvestigatethefusionabilityofhepatocellularcarcinoma(HCC)patientderiveddendriticcells(DCs)phocytestoelicitspecificimmunityagainstHCCinvitro.METHODS:P

2、eripheralbloodmononuclearcells(PBMCs)fromHCCpatientsangranulocyte/macrophageclonestimulatingfactor(rhGMCSF)andinterleukin4(rhIL4),PBMCsoleculesetry.ThefusioncellsofDCsulatetheproliferationofautologousTlymphocytesphocytes(CTLs)olecules,includingCD8390.4%,CD8087.7%,CD8684.4%andHLADR98.5%.The

3、fusioncellshadaremarkablygreaterabilitytostimulatetheproliferationofautologousTlymphocytesinparisonHCCpatientsulateautologousTlymphocytestoelicitspecificantitumorimmunityagainstHCCandmayserveasapromisingvaccineforimmunotherapyofHCC.  【Keya,hepatocellular;immunotherapy  【摘要】目的:将肝细胞癌(HCC)患者树

4、突状细胞(DCs)与肝癌细胞HepG2融合制备瘤苗,检测其体外诱导同源T细胞产生特异性抗HepG2的免疫效应.方法:以血细胞分离机分离富集HCC患者外周血单个核细胞(PBMCs),应用重组人粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(rhGMCSF)、白细胞介素4(rhlL4)体外诱导培养DCs;聚乙二醇融合DCs与肝癌细胞HepG2,MTT法测定融合细胞(DCs/HepG2)刺激同源T淋巴细胞增殖分化能力,细胞毒性实验检测DCs/HepG2诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对HepG2的特异性杀伤作用.结果:融合细胞DCs/HepG2高表达成熟DC表面分子,其中CD8390.4%,CD8

5、087.7%,CD8684.4%,HLADR98.5%;其刺激同源T淋巴细胞增殖的能力显著高于HepG2和DCs;DCs/HepG2活化的CTL对HepG2具有显著杀伤作用,其杀伤率为(63.5±4.6)%(效靶比例为20∶1).结论:HCC患者外周血DC融合HepG2细胞可有效诱导同源T淋巴细胞产生特异性抗HCC免疫效应,可能成为HCC免疫治疗的有效途径.  【关键词】树突细胞;细胞融合;癌,肝细胞;免疫疗法   0引言  肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)因缺乏特异性肿瘤抗原且抗原性弱,其生物治疗相对困难.树突状细胞(dendriticc

6、ells,DCs)是体内功能最强的专职抗原提呈细胞,可摄取、加工处理和提呈抗原,并有效激活T细胞产生抗原特异性免疫应答[1].将DC与肝癌细胞融合,理论上可实现DC对肝癌细胞抗原最充分的提呈,有望获得令人满意的肝癌生物治疗效果.我们利用细胞融合技术将DC与肝癌细胞融合,制备融合细胞疫苗,探讨其生物学特性及抗肿瘤活性,为肝癌DC疫苗临床应用提供实验基础及相关资料.  1材料和方法  1.1材料  RPMI1640培养液、T细胞尼龙毛柱购自美国Gibco公司;Xvivo15无血清培养液购自美国CambrexBioscience公司;淋巴细胞分离液、细胞膜荧光染料PKH26,PK

7、H67,500g/L聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)为美国Sigma公司产品;重组人GMCSF,IL4为美国PeproTech公司产品;新型重组人肿瘤坏死因子nrhTNF购自第四军医大学生物技术中心;ELISA检测试剂盒购自美国RD公司;抗人FITCCD80,HLADRmAb与抗人PECD86,CD83mAb均为美国BDPharMingen公司产品.  1.2方法  以血细胞分离机分离富集HCC患者外周血单个核细胞(PBMCs),淋巴细胞分离液密度梯度离心纯化,无血清Xvivo15培养液重悬

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