高效液相色谱法测定止痢宁片中苦参碱的含量

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1、高效液相色谱法测定止痢宁片中苦参碱的含量【摘要】目的建立高效液相色谱（HPLC）法测定止痢宁片中苦参碱的含量。方法采用C18柱（150mm×4.6mm，5μm），以乙腈－水（1000ml水加2ml三乙胺，用磷酸调pH值至3.0）（4∶96）为流动相，流速为1.0ml/min，柱温为40℃，检测波长为220nm。结果在建立的色谱条件下，苦参碱与杂质能完全分离，苦参碱线性范围为18.712～299.392μg/ml（r＝0.9999），平均回收率为101.60％，RSD为0.8％。结论此法简便准确，专属性好，可用于止痢宁片中苦参碱的含量测定。【关键词】止痢宁片苦参碱高效液相色谱法止痢宁片是由

2、穿心莲、苦参、木香组成的半浸膏片，具有清热祛湿、行气止痛等功效〔1〕，穿心莲和苦参均为其中的主药。本品已收载于卫生部《药品标准中药成方制剂》第四册，其质量标准中未有含量测定项。国内已有关于该药中脱水穿心莲内酯含量测定的研究报道，而未见关于苦参碱含量测定的报道，为更好地控制止痢宁片的质量，本课题组研究建立了HPLC法测定制剂中苦参碱的含量的方法，该方法简便、准确、专属性好，能有效地控制制剂的内在质量。1仪器与材料高效液相色谱仪：Agilent1200（带有Agilent化学工作站）；十万分之一电子天平（Sartoriuscp225D）。苦参碱对照品（批号：110805-200306，供含量

3、测定用），由中国药品生物制品检定所提供。乙腈为色谱纯，水为蒸馏水，其他试剂为分析纯。止痢宁片分别为A：陕西白云制药有限公司（批号：070501）；B：修正药业集团股份有限公司（批号：070603）；C：四川禾邦阳光制药有限责任公司（批号：070801）；D：吉林省跨海生化药业制造公司（批号：20070402）。2方法与结果2.1色谱条件与系统适用性色谱柱：奥泰ODSC18（150mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈－水（1000ml水加2ml三乙胺，用磷酸调pH值至3.0）（4：96）；流速：1.0ml/min；检测波长220nm；柱温40℃；进样量10μl。苦参碱的保留时间为5.0

4、min，与邻峰分离度大于1.5，理论板数不低于2500。阴性对照无干扰。色谱图见图1。2.2溶液的配制2.2.1对照品溶液称取苦参碱对照品约23mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。2.2.2供试品溶液取本品10片，精密称定，研细，取约1片量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，浓氨1.0ml，密塞，称定重量，超声处理20min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。a对照品溶液；b供试品溶液；c阴性对照溶液；1.苦参碱图1苦参碱的HPLC图2.2.3阴性对照液按止痢宁片处方，制成缺苦参的阴性样品，照“2.2.2”项制

5、备方法制得阴性对照液。2.3线性关系考察精密吸取苦参碱对照品储备液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，16.0ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别取稀释液，进样10μl，以苦参碱浓度（单位：μg/ml）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得苦参碱的回归方程为：A=3.5569C-10.812，r=0.9999。苦参碱在18.712～299.392μg/ml范围内线性关系良好。2.4精密度实验精密吸取苦参碱对照品储备液6.0ml，置25ml量瓶中，加甲醇定容至刻度。在上述色谱条件下连续进样6次，测定峰面积，RSD为1.7％（n=6）。2.5稳定性实验取供试品溶液，分

6、别于配制后0，2，4，8h测定，苦参碱峰面积的RSD为1.7％，表明样品溶液在8h内稳定。2.6重复性实验取同一批样品，制备5份供试品溶液，在上述色谱条件下测定，苦参碱的含量分别为3.54，3.58，3.48，3.50，3.42mg/片，平均含量为3.50mg/片，RSD为1.6％，表明本方法重现性良好（n=5）。2.7加样回收率实验精密称取已知含量的样品，共6份，分别精密加入苦参碱适量，按“2.2.2”项供试品溶液制备方法制备6份溶液，依上述色谱条件测定，计算回收率，结果见表1。2.8样品测定取4个厂家的样品，分别按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，以外标法计算样

7、品中苦参碱的含量，结果见表2。表1加样回收实验结果表2样品测定结果3讨论苦参中氧化苦参碱的含量远远高于苦参碱，达到20倍以上〔2〕，但氧化苦参碱不稳定，经加水煎煮转变为苦参碱〔3〕，因在本品的生产工艺中苦参为加水煎煮提取，所以以苦参碱的含量作为控制指标。3.1色谱条件的选择本实验分别对3个流动相系统进行考察，①乙腈－磷酸盐缓冲液（磷酸二氢钾1.36g，加1ml三乙胺，加水至1000ml，磷酸调pH5.5）②乙腈－水（1000ml水加