致人腹泻产气荚膜梭菌的分离鉴定与基因分型

《致人腹泻产气荚膜梭菌的分离鉴定与基因分型》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、致人腹泻产气荚膜梭菌的分离鉴定与基因分型武汉钢铁（集团）公司第二职工医院感染科湖北武汉430085摘要：目的：探讨产气荚膜梭菌与食物中毒之间的联系。方法：采集腹泻病人的粪便样品，进行生化鉴定和细菌分离培养，设计针对cpa、cpb、etx、iA、cpe及cpb2序列的6对特异引物，并采用多重PCR方法，对产气荚膜梭菌进行基因分型。结果：50份样品中，分离出10株产气荚膜梭菌，且均为A型，其中5株扩增cpb2基因。结论：产气荚膜梭菌是导致人类发生腹泻的主要病原菌，而重要的致病因子可能是其β2毒素。关键词

2、：致人腹泻；产气荚膜梭菌；多重PCR;基因分型气荚膜梭菌在自然界中广泛存在，其是人兽皆可感染的病原菌［1］。由于气荚膜梭菌是人与动物肠道内的常见菌，因此其为引发人类腹泻与食物中毒的一个重要诱因。为了对气荚膜梭菌进行深入的研究，我们对腹泻病人的临床样品进行病原的分离鉴定与基因分型，以对引起食物中毒和腹泻的状况进行分析。现报道如下。1.资料和方法1.1一般资料釆集腹泻病人的临床粪便样品共计50份，不同个体的粪便样品分开收集，并标注编号以区分不同病患的样品。1.2气荚膜梭菌的分离鉴定取6g粪便样品，加入灭菌生理盐水

3、50mL，以1000r/min速度搅拌充分后，离心lOmin,取上清液lmL接种10mL的紫牛乳培养液，送入厌氧培养罐进行43°C厌氧培养9-12h。对出现爆裂发酵的培养液，划线于TSC平板后，进行43°C厌氧培养24h,挑选疑似菌落进一步分离纯化。挑选平板上黑色菌落接种接种鲜血琼脂平板，经厌氧培养24h后，挑选出现双环溶血的菌落，进一步采用标准化试剂盒进行生化鉴定。1.3菌株的基因分型1.3.1PCR引物设计根据产气荚膜梭菌毒素基因序列设计的引物序列见表1。1.3.2多重PCR扩增在反应体系中加入缓冲液、混

4、合引物、火菌超纯水,DNA模板10μL,TaqDNA聚合酶lμL,以50μL火菌石蜡汕覆盖。反应程序：94°C变性lmin,55°C退火lmin，72°C延伸lmin，共进行35个循环，最后72°C延伸lOmin。待PCR反应结束后，取8μLPCR产物经40min电泳后，观察扩增片段的大小。1.结果通过细菌分离鉴定，鉴定出的产气荚膜梭菌有10株。经电泳鉴定，这10株产气荚膜梭菌出现大小为324bp的特异性条带，未扩增cpb、etx和iA特异性条带，说明10株均为A型。10株细菌均未扩增

5、出CPE的特异性条带，但奋5株扩增出针对cpb2的特异性条带。2.讨论产气荚膜梭菌是人与动物肠道内的常驻菌种，苏毒力主要取决于苏产生毒素的能力。由于产气荚膜梭菌作为导致人类发生腹泻的病原菌，因此苏作用不容忽视。产气荚膜梭菌的CPE和β2毒素与致腹泻具奋显著相关性。因此，在本次研究中，不仅设计针对四种分型毒素的引物，还增设针对CPE和β2毒素引物。在10株分离株中，冇5株扩增cpb2基因，表明β2毒素在导致人类发生腹泻的过程中产生一定作用，但其致病机理尚不明确，需进一步深入探讨。据

6、相关研究报道［2］，产气荚膜梭菌导致人类腹泻的主要毒素是CPE，但经本次研究发现，所分离的10个菌株均未扩增CPE基因，这表明，除CPE外引起腹泻的毒素另有他物，如β2毒素。为有效的控制腹泻的发生，需从病因着手。第一，加强食品安全检查，阻止产气荚膜梭菌的污染，对其可能发生人规模繁殖的环节,采取相应控制措施。第二，慎用抗生素［3】。滥用抗生素，不仅导致耐药菌株的产生，还可能造成产气荚膜梭菌的大量繁殖，致使腹泻的发生，因此使用抗生素须遵照医师的建议。综上所述，产气荚膜梭菌是导致人类发生腹泻的主要病原菌，

7、而重要的致病因子可能是其β2毒素。参考文献：［1】胡贺，覃宗华，王艳华等.不同地区鸡源产气荚膜梭菌的毒素型鉴定和药敏试验［J］.畜牧与兽医，2015,47(10)：28-34.［2】张艳，李兰兰，黄艺华等.鸡产气荚膜梭菌的分离鉴定及药敏试验［」］.中国兽医杂志，2015,51(4)：73-76.［3】冶贵生，马玉花，张爽等.A型产气荚膜梭菌tetB(P)耐药基因核苷酸序列与蛋白结构分析［」］.甘肃农业大学学报，2015,50(4)：160-164.