鸡产气荚膜梭菌的分离鉴定及药敏试验-论文.pdf

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1、动物医学进展。2013，34(12)：228—232ProgressinVeterinaryMedicine鸡产气荚膜梭菌的分离鉴定及药敏试验陈海宁，廖申权，戚南山，李娟，吕敏娜，孙铭飞，吴彩艳卜(1．广东省农业科学院动物卫生研究所，广东广州510640；2．河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002)摘要：为确定广东韶关地区两个养殖密度较大鸡场病死鸡的患病病原，根据临床症状、剖检病变疑似坏死性肠炎，每场各分离到1株细菌，通过对细菌分离株进行形态培养、生化鉴定、牛乳汹涌发酵试验、PCR种特异性和毒素型鉴定等试验

2、，鉴定2个分离株均为A型产气荚膜梭菌。对分离株进行药敏试验，测定了临床上常用的抗茵药物添加剂对两株产气荚膜梭茵的最小抑菌浓度(MIC)，结果显示恩拉霉素和维吉尼亚霉素对两分离株具有良好的抑菌效果，黄霉素、吉他霉素、硫酸黏杆菌素对个别菌株具有抑茵作用，而那西肽则无明显抑茵作用。研究结果可为鸡坏死性肠炎的临床防控提供参考。关键词：产气荚膜梭菌；分离鉴定；最小抑菌浓度中图分类号：$852．616．3文献标识码：B文章编号：1007—5038(2013)12-0228-05鸡坏死性肠炎(Necroticenteritis，

3、NE)又称肠毒卧，不愿站立，食欲减退消瘦，严重下痢，粪便混有血血症、烂肠症，由产气荚膜梭菌(Clostridiumpe砌一液涪0检病鸡小肠肠道肿胀充血，肠内充满泡沫状液gens)引起的一种以侵害鸡只肠道，引起肠道出血、溃体，肠黏膜布满出血点。肝脏和脾脏肿大出血；肠道疡、坏死为主要特征的一种疾病]。产气荚膜梭菌是粪便涂片镜检显示，粪便中仅存在极少数卵囊，尚不一种广泛分布于自然界和动物肠道中的条件性致病足以引起球虫病。根据流行情况、临床症状和剖检病菌，该病经常与小肠球虫病并发或继发。目前该病已变，疑雏鸡患坏死性肠炎，为

4、进一步确诊，需进行病原广泛分布于世界各地，呈全球流行态势，严重危害各分离培养及鉴定试验。国养禽业的发展。产气荚膜梭菌能产生多种外毒素1．1_2试剂及培养基鲜血琼脂培养基、液体硫乙和酶类，根据产生4种主要致死性毒素及其抗毒素的醇酸盐培养基(FT)、TSC(胰蛋白胨一亚硫酸铁一环丝氨中和试验，可将此菌分为A、B、C、D、E5个型r2]。目酸)培养基、麦康凯培养基按细菌学常规方法配制；微前国内流行的感染禽类的产气荚膜梭菌主要是A量生化发酵管购自广东环凯生物科技有限公司；脱脂型口]。近年来随着抗坏死性肠炎药物的广泛使用，使

5、奶粉购自广州鼎国生物公司；PremixTaq、DNA鸡产气荚膜梭菌产生了严重的耐药性，为临床治疗时MarkerDL2000，TaKaRa公司产品；PCR定型引物选择用药带来了巨大的困难]。由广州英俊生物技术工程公司合成；A型产气荚膜梭本研究从广东韶关某两个大型养鸡场疑似患坏菌标准株购自中国兽医药品监察所；各种抗菌药物均死性肠炎的肉鸡中，分离到2株产气荚膜梭菌，对其为国内通过GMP验收的正规兽药企业生产。进行了生化和分子生物学鉴定，并对其抗药性进行了1．1．3产气荚膜梭茵毒素型鉴定引物多重PCR体详细研究，为鸡坏死性

6、肠炎的临床防控提供一定的参系引物参照文献E5]合成，预期片段分别为325、196、考。665、446bp。1材料与方法1．2方法1．1材料1．2．1病原的分离与鉴定1．1．1发病情况广东韶关地区3000只鸡规模的1．2．1．1病原的分离将分离的小肠用无菌剪刀剪2个养殖场的20日龄雏鸡发病，3日龄时已经免疫球一小段，以灭菌FT培养基清洗几次，去除粪便及血虫活卵囊疫苗，当地气温较高且潮湿，许多雏鸡发病，液，用灭菌环从小肠内容物中勾取一环分别划线接种病死率约5左右；病鸡表现精神不振，羽毛蓬乱，喜鲜血琼脂平板、麦康凯平板与

7、TSC平板，37℃过夜厌收稿日期：2013—04—09基金项目：广东省农业攻关项目(2012A020100001)作者简介：陈海宁(1989一)，女，河南驻马店人，硕士研究生，主要从事鸡球虫生化代谢研究。廖申权(1981一)，女，重庆荣昌人，助理研究员，博士，主要从事鸡球虫生化代谢研究。△同等贡献作者。*通讯作者陈海宁等：鸡产气荚膜梭菌的分离鉴定及药敏试验231从结果可以看出恩拉霉素和维吉尼亚霉素对2个菌的抗药性问题愈加突出。株CP具有良好的抑菌效果，但MIC尚有差别。如对本次分离的两株产气荚膜梭菌进行MIC的恩拉

8、霉素对SG1的MIC为16肚g／mL，而对SG2的测定显示，恩拉霉素和维吉尼亚霉素对2个菌株具MIC为32／~g／mL，维吉尼亚霉素对两株MIC均为有良好的抑菌效果，黄霉素、吉他霉素、硫酸黏杆菌64Fg／mL；黄霉素、吉他霉素、硫酸黏杆菌素对部分素对部分菌株具有抑制作用，而那西肽则无明显抑细菌具有抑制作用，黄霉素对SG1的MIC为128制作用。由此看出，养殖