土壤微生物量碳测定方法

《土壤微生物量碳测定方法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、土壤微生物量碳测定方法及应用土壤微生物量碳（Soilmicrobialbiomass）不仅对土壤有机质和养分的循环起着主要作用，同时是一个重要活性养分库，直接调控着土壤养分（如氮、磷和硫等）的保持和释放及其植物有效性。近40年来，土壤微生物生物量的研究已成为土壤学研究热点之一。由于土壤微生物的碳含量通常是恒定的，因此采用土壤微生物碳(Microbialbiomasscarbon,Bc)来表示土壤微生物生物量的大小。测定土壤微生物碳的主要方法为熏蒸培养法（Fumigation-incubation,FI）和熏蒸

2、提取法（Fumigation-extraction,FE）。熏蒸提取法（FE法）由于熏蒸培养法测定土壤微生物量碳不仅需要较长的时间而且不适合于强酸性土壤、加入新鲜有机底物的土壤以及水田土壤。Voroney(1983)发现熏蒸土壤用0.5mol·L-1K2SO4提取液提取的碳量与生物微生物量有很好的相关性。Vance等(1987)建立了熏蒸提取法测定土壤微生物碳的基本方法：该方法用0.5mol·L-1K2SO4提取剂（水土比1：4）直接提取熏蒸和不熏蒸土壤，提取液中有机碳含量用重铬酸钾氧化法测定；以熏蒸与不熏蒸

3、土壤提取的有机碳增加量除以转换系数KEC(取值0.38)来计算土壤微生物碳。Wu等（1990）通过采用熏蒸培养法和熏蒸提取法比较研究，建立了熏蒸提取——碳自动一起法测定土壤微生物碳。该方法大幅度提高提取液中有机碳的测定速度和测定结果的准确度。林启美等（1999）对熏蒸提取-重铬酸钾氧化法中提取液的水土比以及氧化剂进行了改进，以提高该方法的测定结果的重复性和准确性。对于熏蒸提取法测定土壤微生物生物碳的转换系数KEC的取值，有很多研究进行了大量的研究。测定KEC值的实验方法有：直接法（加入培养微生物、用14C底物

4、标记土壤微生物）和间接法（与熏蒸培养法、显微镜观测法、ATP法及底物诱导呼吸法比较）。提取液中有机碳的测定方法不同（如氧化法和仪器法），那么转换系数KEC取值也不同，如采用氧化法和一起法KEC值分别为0.38（Vance等，1987）和0.45（Wu等，1990）。不同类型土壤（表层）的KEC值有较大不同，其值变化为0.20-0.50（Sparling等，1988，1990；Bremer等，1990）。Dictor等（1998）研究表明同一土壤剖面中不同浓度土层土壤的转换系数KEC有较大的差异，从表层0-20

5、cm土壤的KEC为0.41，逐步降低到180-220cm土壤的KEC为0.31。一、基本原理熏蒸提取法测定微生物碳的基本原理是：氯仿熏蒸土壤时由于微生物的细胞膜被氯仿破坏而杀死，微生物中部分组分成分特别是细胞质在酶的作用下自溶和转化为K2SO4溶液可提取成分（Joergensen,1996）。采用重铬酸钾氧化法或碳-自动分析仪器法测定提取液中的碳含量，以熏蒸与不熏蒸土壤中提取碳增量除以转换系数KEC来估计土壤微生物碳。二、试剂配制（1）硫酸钾提取剂（0.5mol·L-1）：取871.25g分析纯硫酸钾溶解于蒸

6、馏水中，定溶至10L。由于硫酸钾较难溶解，配制时可用20L塑料桶密闭后置于苗床上（60-100rev·min-1）12小时即可完全溶解。（2）0.2mol·L-1（1/6K2Cr2O7）标准溶液：称取130℃烘2-3小时的K2Cr2O7（分析纯）9.806g于1L大烧杯中，加去离子水使其溶解，定溶至1L。K2Cr2O7较难溶解，可加热加快其溶解。（3）0.1000mol·L-1（1/6K2Cr2O7）标准溶液：取经130℃烘2-3小时的分析纯重铬酸钾4.903g，用蒸馏水溶解并定溶至1L。3（1）邻啡罗啉指示

7、剂：取邻啡罗啉指1.490g溶于含有0.700g分析纯硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）的100ml蒸馏水中，此溶液易变质，应密闭保存于棕色瓶中。（2）硫酸亚铁标准溶液（0.05mol·L-1）：称取13.9g分析纯硫酸亚铁（FeSO4·7H2O），溶于800ml蒸馏水中，慢慢加浓硫酸5ml（防止水解），定溶至1L，保存于棕色瓶中。此溶液易被空气氧化，每次使用时必须标定其准确浓度：硫酸亚铁溶液标定方法：吸取0.1000mol·L-1（1/6K2Cr2O7）标准溶液5.0ml（浓度为0.05mol·L-1，1/6

8、K2Cr2O7），放入150ml的三角瓶中，加浓硫酸5ml和邻啡罗啉指示剂2滴，用硫酸亚铁溶液滴定，滴至溶液由蓝绿色变为棕红色即为终点。根据滴到终点消耗的硫酸亚铁溶液量计算其准确浓度，即C2=(C1*V1)/V2。式中：C1——重铬酸钾标准溶液浓度（0.1000mol·L-1）C2——硫酸亚铁标准溶液浓度（mol·L-1）V1——吸取的重铬酸钾标准溶液体积（5ml）V2——滴到终点时消耗硫酸亚铁溶液