结核医学课件结核分枝杆菌与其他原核细胞型微生物

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1、第五次实验结核分枝杆菌与其他原核细胞型微生物微生物学教研室1、检查牙垢中螺旋体（1份/人）2、结核痰标本抗酸染色（1份/人）3、真菌检查法（1份/人）4、观察结核杆菌培养物（示教）5、观察梅毒螺旋体形态（示教）6、观察支原体集落（示教）7、HIV（录象）实验内容教学目的认识痰标本的抗酸染色方法及结核分枝杆菌的菌落特点认识螺旋体及支原体形态学观察方法认识真菌检查法教学要求掌握结核分枝杆菌的染色方法及结果判断掌握真菌检查法熟悉结核分枝杆菌的菌落特点与螺旋体及支原体形态学观察方法结核痰标本抗酸染色结核标本的检查有直接涂片，培养及动物接种等几种方法，直接涂片抗酸染色镜检找到抗酸杆菌，可作初步诊断。

2、如标本量大，污染杂质多，含结核杆菌数较少时，直接涂片染色往往不易检出，因一般每毫升痰液含10万个结核杆菌以上才能检出，故如先浓缩集菌处理，再进行涂片检查，可以提高阳性率。在镜检发现抗酸性不强或菌型不典型时，应考虑非典型分枝杆菌，需作进一步分离培养鉴定。动物接种可供标本分离及测定结核杆菌的毒力。结核痰标本抗酸染色原理抗酸性染色也是一种重要的鉴别染色。由于抗酸性细菌含有分枝菌酸。在完整的细胞壁中它能与石炭酸和复红所形成的复合物牢固地结合，并能抵抗酸性酒精的脱色，故被染成红色，而非抗酸性细菌因不含有分枝菌酸，故易脱色，并被复染剂染成兰色。材料标本：肺结核病人的痰染液：石炭酸复红碱性美兰3％盐酸酒

3、精其他:接种环、酒精灯、75％酒精方法挑取痰液涂片（厚涂片）干燥固定石炭酸复红15分钟（初染）水洗3％盐酸酒精（脱色）水洗碱性美兰1分钟（复染）水洗干燥镜检注意：厚涂片结核病人痰标本涂片重复三次!箭头所示为抗酸菌形态染色性排列形态染色菌体细长微弯，有分枝，排列不规则，多单个散在，易发生L型，抗酸染色阳性检查牙垢中螺旋体螺旋体是一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状，多数比细菌大，介于细菌与原虫之间，无鞭毛，但有轴丝（壁与膜之间），运动活泼的G-原核细胞型微生物，广泛分布于自然界与动物体，种类多，多为非致病性，仅少数对人致病，对人致病的有钩端螺旋体、回归热螺旋体和梅毒螺旋体等。正常人口腔牙龈部寄居有奋

4、森氏螺旋体，并与梭形杆菌共存，当机体抵抗力下降时（如病后），这两种菌大量繁殖，梭形杆菌协同奋森氏螺旋体可引起奋森咽峡炎、奋森氏口炎、牙龈炎和口腔坏疽等。材料牙签、生理盐水、玻片染液结晶紫、碘液、95%酒精、稀释石碳酸复红方法1．玻片一张，放生理盐水1-2环，用牙签取牙垢少许与生理盐水混合制成涂片2．待涂片干后火焰固定,革兰氏染色,镜检牙垢螺旋体检查涂片制备标本涂片---干燥---固定---结晶紫初染1分钟---水洗---碘液媒染1分钟---水洗---95%酒精脱色---水洗---稀释石碳酸复红染液复染30秒钟---水洗---自干或烘干、印干---镜检（油镜）真菌检查法真菌（fungus）是

5、一大类具有细胞壁和典型细胞核不含叶绿素，不分根、茎、叶的真核细胞型微生物。真菌的形态有单细胞和多细胞两大类，单细胞真菌呈圆形或卵圆形常见于酵母菌，类酵母菌以出芽方式繁殖。多细胞真菌大多长出菌丝与孢子，各种多细胞真菌的菌丝与孢子形态不同，菌落特征也不同，是鉴别真菌的重要标志。真菌基本形态单细胞真菌：白假丝酵母，卵圆形，革兰染色阳性，着色不一，可见假菌丝。多细胞真菌形态sporehypha菌落特征:酵母型菌落类酵母型菌落丝状菌落单细胞多细胞酵母型菌落类酵母型菌落酵母型菌落类酵母型菌落真菌的菌落白假丝酵母：菌落圆形，较大，白色菌落底层有假菌丝多细胞真菌：观察气生菌丝，营养菌丝，表面隆起，浅沟及菌

6、落基底颜色。白假丝酵母(血平板)黄曲霉1、营养要求不高，常用沙保弱培养基培养。2、生长缓慢，培养1—4周才出现典型菌落。3、培养温度为22--28℃，但某些深部真菌最适生长温度为37℃。4、最适酸碱度为PH4.0—6.0。5、湿度要求较高。真菌培养特性原理直接涂片检查用显微镜直接检查标本中有无菌丝及孢子的存在，对皮肤丝状菌的感染可作初步诊断，本法简单迅速易行。材料标本:脚皮等试剂:10％KOH其他:玻片、镊子、酒精灯等方法KOH透明法（1）取脚皮少许于玻片上，加二滴10%KoH溶液，覆盖一盖玻片，置火焰上微微加热，以加速角质溶解，使标本透明，然后微微加压，使成薄片，并需驱去气泡，用吸水纸吸

7、去周围溢液，（如为毛发标本，切忌加热加压过甚，以保持毛发原形为宜，便于观察真菌与毛发的关系）显微镜检查。（2）将已制备的标本片，先用低倍镜检查，然后再用高倍镜证实注意：盖玻片倾斜45度慢慢盖上，不能产生气泡！标本片制备真菌检查镜下观报告：“找到菌丝或孢子”“找到发外孢子”“找到发内菌丝”各种操作步骤抗酸染色:挑取痰液涂片（厚涂片）干燥固定石炭酸复红20分钟（初染）水洗3％盐酸酒精(脱色)（粉红到无色）水洗碱性美兰1分钟（