人牙髓细胞dpdp

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1、人牙髓细胞DPDP【关键词】牙髓/细胞学；牙龈；成纤维细胞；基因文库；序列分析；BLAST分析　　SequenceanalysisofDPDP2geneclonedfromhumandentalpulpcells　　【Abstract】AIM:TostudythefunctionofDPDP2,anehumandentalpulpcell(HDPC).METHODS:AmodifiedPCRbasedsubtractivehybridizationtechniqueangingivalfibroblasts(HGF)edDPDP2edbyPC/GENE6.60sof

2、tentofDPDP2clonedfromthepresentsubtractivecDNAlibraryedKIAA0265,a6172bppletecDNAsequenceation,anextendedconformationandacoilconformation.Thesecondarystructurescouldassembleathreedimensionalstructurethroughfoldingofα,βorα/βsheets.Antigenepitopeanalysisimpliedthreepossibleantigenicdeterm

3、inants:GluAsnLysArgThrGly,LeuIleGluArgLeuLysandGluLeuAlaTrpGluLys.AtransmembranehelicalstructureandamitochondriatransportationstructureogeneousproteinembraneproteinthathasbothsignaltransductionstructuralfeaturesandCKIIphosphorylationsite,indicatingitspossiblefunctionalrelationshipitosi

4、sandtranscription.　　【Keyandentalpulpcell,HDPC）是牙髓组织在损伤、感染的情况下，具有自身修复能力的生物学基础［1］.关于其再生、分化机制的研究，一直是近年来牙髓生物学的一个重要研究内容.HDPC具有区别于其他成纤维细胞的特性，即HDPC具有分化为成牙本质细胞进而形成牙本质的能力，而具有同样胚胎起源的牙龈成纤维细胞（Humangingivalfibroblast,HGF）并不具备这种能力.基因表达的变化处于控制生物学调节的中心位置［2］，因此，了解细胞差异基因的表达，有助于阐明生命的奥秘；同时，亦可以提示造成两种细胞表型差异

5、的遗传学基础.　　　　目前，人类及其他模式生物的基因资料在各种数据库中迅速增长.要尽快读懂人类基因组的这10万个基因，利用这些现有的基因资料，分析其结构、功能，成为基因组后研究所要亟待解决的关键问题［3］.我们在既往的研究中构建了HDPC与HGFcDNA消减文库并克隆得到了一条新的基因序列─DPDP2基因［4］.本研究我们在此基础上，进一步测定了该克隆序列全长，并运用计算机软件PC/GENE6.60版对其进行分析，以期为其结构、功能的最终阐明提供理论依据.　　1材料和方法　　1.1材料BluescriptKS和DH5α均为第四军医大学生化与分子生物学实验室所保存，限

6、制性内切酶购自华美生物工程公司，T4DNALigase购自GibcoBR（15224041），DNAMarkerDL2000购自TaKaRaBiotech（D501CA），核酸胶回收试剂盒购自NucleoTrapGelExtractionkit（CLONTECH），柱离心式质粒抽提纯试剂盒购自上海华舜生物工程有限公司.　　1.2方法　　1.2.1HDPC与HGF的培养［5］取年龄10~20岁本院门诊患者因正畸需要而拔除的健康恒牙，并切取小块牙龈分别立即置含抗生素预冷的Hanks液中带回实验室，采用常规组织块法进行培养.培养液为含150mL/L胎牛血清的DMEM，培养

7、条件为5mL/LCO2,37℃，饱和湿度.培养的HDPC与HGF经抗波形丝蛋白，角蛋白单抗ABC法染色，以鉴定其细胞起源.成活后进行传代培养，细胞传代至第4~10代细胞，待细胞呈对数生长并达到80%覆盖率时，收集细胞，立即进行总RNA提取.　　1.2.2HDPC与HGFcDNA消减文库的构建，参照文献［4,6］进行.　　1.2.3DPDP2基因的克隆、序列测定及BLAST分析①纯化所选取的含有人牙髓细胞差异表达基因片段cDNA克隆，均以正向引物（T7）为测序引物，用自动序列分析仪按说明进行测序反应.测序后，通过国际互联网（.ncbi.nlm.nih.gov/BL