膀胱癌抑癌基因apaf

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1、膀胱癌抑癌基因Apaf：潘俊，陈凌武，王文卫，瞿虎，王声正【摘要】【目的】研究抑癌基因细胞凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)和腺瘤性结肠息肉病相关基因(APC)的启动子甲基化状况与膀胱癌临床病理的关系及对患者复发的影响。【方法】采用甲基化特异性PCR方法检测110例膀胱癌组织中Apaf-1和APC的启动子甲基化状态，以15例正常膀胱黏膜组织为对照组。【结果】Apaf-1和APC基因在膀胱癌组织中的甲基化率为90.0%和82.7%，在正常膀胱组织为6.77%和20.0%，差异分别有统计学意义(P均=0.000)。Apaf-1及AP

2、C的甲基化率与肿瘤分化程度及临床分期有明显的相关性，随肿瘤分级、分期的增加而升高。在复发组与未复发组的比较中，Apaf-1的甲基化阳性率分别为97.6%(41/42)和85.3%(58/68)，差异有统计学意义(χ2=4.382，P=0.036)，而APC的甲基化率分别为85.7%(36/42)和80.9%(55/68)，差异无统计学意义(χ2=0.424，P=0.515)。【结论】Apaf-1及APC的甲基化改变在膀胱癌的发生、发展过程中具有重要作用，Apaf-1启动子甲基化可能成为膀胱癌患者预后判断的分子标志物。【关键词】膀胱癌

3、;甲基化;肿瘤抑制基因;Apaf-1;APC　　Abstract：【Objective】TostudytheApaf-1andAPCpromotermethylationstatusanditsrelationa.【Methods】MethylationstatusofApaf-1andAPCgenepromoterin110specimensofbladdercarcinomaand15normalbladdertissuesethylation-specificPCR.【Results】ThemethylationrateofA

4、paf-1andAPCa(90.0%，82.7%)thanthatofnormalbladdertissues(6.77%，20.0%)respectivelyethylationrateofApaf-1andAPCcorrelatedarespectively，increasedentoftumorgradesandstages.BetethylationratesofApaf-1ethylationstatusofApaf-1andAPCentofbladdercarcinoma，themethylationstatusofAp

5、af-1maybeeanearkerofprognosisinbladdercarcinoma.　　目前普遍认为，在肿瘤转化过程中抑癌基因功能的失活比原癌基因的激活起更关键作用，而DNA异常甲基化可直接修饰和关闭抑癌基因的功能。细胞凋亡蛋白酶活化因子-1基因(apoptoticproteaseactivatingfactor-1，Apaf-1)是c-Myc诱导肿瘤细胞凋亡中p53的下游成分，Apaf-1基因可以控制肿瘤的发展。已证实在白血病等恶性肿瘤中都出现了Apaf-1基因转录和翻译水平的下调[1]，但在泌尿系肿瘤尤其是膀胱癌中有

6、关Apaf-1的研究报道相对较少[2]。SP法)检测Apaf-1和APC基因在膀胱癌中的启动子甲基化状况，并分析其与膀胱癌临床特点的关系及在患者术后复发监测中的应用价值。　　1材料和方法　　1.1临床资料　　收集2001年1月至2005年12月在我院确诊为膀胱移行细胞癌的患者的临床资料，入选条件：①临床资料完整。②蜡块内组织较大，可供提取DNA。筛选出150名患者，成功随防到110患者，随防成功率73.3%，其中男78例，女32例。手术时年龄36～72岁，平均62.5岁。病理分级按分期标准，浅表性(Tis～T1)48例，侵润性肿瘤(

7、T2～T4)62例。另取15例正常膀胱粘膜组织常规石蜡包埋切片作对照组。15例正常膀胱粘膜组织标本均来自于行膀胱全切术时在离肿瘤边缘5cm以外的无肿瘤组织，HE染色病理学检查确认无肿瘤细胞。　　1.2石蜡切片中DNA组织的提取　　每个标本切取10μm厚度切片3～4张，无需脱蜡，直接用TaKaRaDEXPATTM试剂盒(大连宝生)，按步骤向石蜡包埋组织切片上加入TaKaRaDEXPATTM后，只需100℃加热和4℃离心，就可以得到PCR扩增用DNA，紫外分光度仪确定DNA的含量和纯度。　　1.3甲基化特异性PCR分析　　采用CPGen

8、omeTMDNAModificationKit试剂盒(Chemicon，USA)，对样本DNA进行亚硫酸氢钠修饰并纯化回收，引物设计采用Primerpremier5.0引物设计专门软件，由Invitrogen公司鉴定合成。Apaf-1