曲古抑菌素a对膀胱癌t24细胞增殖及apaf

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1、曲古抑菌素A对膀胱癌T24细胞增殖及Apaf：王文卫陈俊星潘俊肖峻林焕懿陈凌武【摘要】【目的】研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人膀胱癌T24细胞的增殖抑制作用及对Apaf-1、APC基因表达的影响。【方法】采用3×10-4mmol/LTSA作用T24细胞，MTT法检测TSA对T24细胞生长的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测TSA作用前后T24细胞周期和凋亡的变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TSA作用前后膀胱癌细胞中Apaf-1、APCmRNA表达的变化。【结果】TSA对T24细胞的生长具有明显的抑制作用;TSA作用后T24细胞的G0/G

2、1期比例增加，S期比例减少，细胞凋亡率增加(P<0.05);RT-PCR结果显示TSA处理能明显诱导Apaf-1、APC基因表达增加。【结论】TSA能抑制T24细胞体外生长，诱导细胞周期阻滞和凋亡，其可能通过诱导Apaf-1、APC基因表达增加而发挥体外抗膀胱癌作用。【关键词】膀胱癌;曲古霉素抑菌素A;Apaf-1基因;APC基因　Abstract：【Objective】ToinvestigatetheeffectofTrichostatinA(TSA)，ahistonedeacetylaseinhibitor(HDACi)，onthegroanbladdercan

3、cercellsandtheexpressionofApaf-1andAPCinvitro，andtoexplorethepossiblemechanism.【Methods】T24cellsmol/LTSA;Aftertreatment，cellgroeasuredbyMTTassay;Cellapoptosischangesandthecellcycledistributioninedbyfloetry(FCM).TheexpressionofApaf-1andAPCmRNAetryshoentRNAlevelotedafterTSAtreatment.【Conclu

4、sion】TSAcaninhibitT24cellsgroightberelatedtotheexpressionofApaf-1andAPC.　　组蛋白乙酰化修饰是表观遗传调控最主要的研究内容之一，其通过改变染色质的构型调控基因转录，与恶性肿瘤具有密切的关系。抑制细胞内组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylase，HDAC)的活性，可增加组蛋白的乙酰化程度，具有抑制肿瘤细胞的生长，诱导分化和(或)凋亡的作用[1]。曲古抑菌素(trichostatinA，TSA)是一种氧肟酸类HDAC抑制剂，本研究应用TSA体外作用于人膀胱癌T24细胞株，观察其细胞生物学行为改

5、变和人凋亡蛋白酶活化因子-1基因(apoptosisproteaseactivatingfactor-1，Apaf-1)、结肠腺瘤性息肉病基因(adenomatouspolyposiscoli，APC)表达的变化，探讨TSA作用于膀胱癌的可能机制并为HDAC抑制剂应用于膀胱癌治疗提供理论依据。　　1材料和方法　　1.1细胞培养及主要试剂　　人膀胱移行细胞癌细胞株T24购于中国科学院上海生物细胞研究所，培养于含100mL/L胎牛血清、100U/mL青霉素100mg/mL链霉素的RPMI1640培养基。在37℃、体积百分比为5%CO2饱和湿度条件下生长传代，实验时取对数生长期

6、的细胞。TSA为美国Sigma公司产品，按说明配置成储存液，用RPMI1640培养基稀释成工作液。MTT、二甲基亚砜(DMSO)、碘化丙啶(PI)均购于广州威佳生物公司，凋亡试剂盒(KGA108)购于南京凯基生物科技发展有限公司，Trizol试剂，Tag酶，逆转录酶M-MLV，RT-PCR试剂盒均购于Takara公司，　　1.2细胞增殖抑制实验(MTT)测定TSA对T24细胞系增殖活性的影响　　取对数生长期，以台盼蓝检测活力大于95%的T24细胞以104/孔密度接种于96孔细胞培养板，每孔体积200μL，细胞贴壁后以无血清培养基静止24h，实验组加入终浓度为3×10-4m

7、mol/LTSA，对照组加入等量的培养液，各组均设3复孔。置于37℃，体积分数为5%CO2培养箱内培养，分别于24h、48h、72h进行处理，每孔加入5mg/mLMTT20μL/孔，37℃，体积分数为5%CO2继续孵育4h，小心吸弃上清，加入二甲基亚砜(DMSO)150μL/孔，充分混匀，于Bio-Tek酶标仪分析490nm处吸光度值。用下面的公式计算抑制率：抑制率(%)=(1-实验组吸光度值/对照组吸光度值)×100%。　　1.3流式细胞术(FCM)检测T24细胞周期变化　　取对数生长期的T24细胞按106/孔接种于6孔细胞