五种菊花近缘植物组织培养研究

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1、五种菊花近缘植物组织培养研究摘要：以紫花野菊变种、纪伊潮菊、龙脑菊、那贺川野菊和矶菊５个菊花近缘种属植物无菌苗为试材，进行了茎段离体快繁体系和离体叶片不定芽再生体系研究。结果表明：最佳茎段增殖培养基分别为：紫花野菊变种，MS＋１.０mg·L－１６BA＋（０.０５～０.１０）mg·L－１IBA；纪伊潮菊，MS＋２.０mg·L－１KT＋０.１mg·L－１NAA；龙脑菊，MS＋０.５mg·L－１KT＋０.１mg·L－１NAA；那贺川野菊，MS＋１.０mg·L－１KT＋０.１mg·L－１NAA；矶菊，MS＋

2、２.０mg·L－１６BA＋０.１mg·L－１NAA。紫花野菊变种、纪伊潮菊、龙脑菊、那贺川野菊试管苗适宜生根培养基是１／２MS；矶菊试管苗适宜生根培养基为１／２MS＋０.２mg·L－１NAA。５个材料试管苗离体叶片愈伤组织诱导率均较高，但不定芽的诱导率则因基因型而异，仅那贺川野菊和矶菊能诱导出不定芽。那贺川野菊在MS＋０.５mg·L－１KT＋０.１mg·L－１NAA培养基上不定芽的再生率和增殖系数均最高，分别为７５.０％和３.４；而矶菊在MS＋１.０mg·L－１６BA＋０.５mg·L－１NAA培养基

3、上的不定芽再生率和增殖系数最高，分别达８０.０％和５.８。关键词：菊花近缘植物；茎段；叶片；组织培养菊花近缘种属野生资源具有抗虫、抗病、抗逆等优良性状，对栽培菊花的品种改良、抗性育种等种质创新十分重要，同时也是进行菊属亲缘关系探讨和栽培菊花起源研究的重要材料。但来自不同生态类型的菊花近缘野生材料在越夏或越冬时难以存活，造成种质资源严重丢失。植物组织培养技术已广泛应用于种质资源保存和离体快繁。自Hill（１９６８）利用芽尖外植体通过愈伤组织诱导成株建立菊花再生体系以来，许多学者以叶片［１－３］、茎段［

4、４－５］、管状花［６－７］、花梗［８］等为外植体相继建立了菊花的离体再生体系，原生质体培养［８］和体细胞胚培养再生体系［８］也获得了成功，但有关菊花近缘野生物种组织培养研究鲜见报道。本试验以引自日本的具有抗虫性、耐盐性、耐水湿等优良性状的５种野生材料紫花野菊变种（Dendranthemazawadskiivar.latilobum）、纪伊潮菊（Ajaniashiwogikuvar.kinokuniense）、龙脑菊（D.japonicum）、那贺川野菊（D.yoshinaganthum）、矶菊（A.

5、pacificum）为试料，探讨了不同生长调节剂组合和培养基种类对试管苗增殖、离体叶片愈伤组织诱导、不定芽再生以及试管苗生根的影响，初步建立了５种供试菊花近缘野生植物的离体快繁体系和不定芽再生体系，为该类具优良抗性性状野生资源的保存和利用奠定了基础。1　材料与方法1.1　材料　　５种供试菊花近缘野生材料（表１）均从日本收集，保存于南京农业大学“中国菊花种质资源保存中心”。表1　5种菊花近缘野生材料代号Code中文名染色体数目花色RG７紫花野菊变种２n＝２x＝１８白色～粉色ZB１纪伊潮菊２n＝８x＝７

6、２黄色ZB６龙脑菊２n＝２x＝１８白色ZB７那贺川野菊２n＝４x＝３６白色～粉色ZB８矶菊２n＝１０x＝９０黄色1.2　5种菊花近缘野生植物离体快繁体系的建立1.2.1　不同植物生长调节剂组合对增殖的影响　选取生长健壮的无菌苗，切割成带１个节的节段，接种到增殖培养基中诱导不定芽，共设９个处理（表２）。每处理接种１０个外植体，３次重复。培养２０d后统计增殖系数。增殖系数＝（增殖后芽总数－接种芽数）／接种芽数（注：接种后死亡芽数不计入）。1.2.2不同基本培养基对生根的影响　将增殖培养诱导的健壮不定芽切

7、割成带３个叶片、长１.５～２.５cm的茎段，分别接种至MS、１／２MS培养基中进行生根诱导。每处理６瓶，每瓶接种４个外植体。２０d后统计生根苗数及平均根数，测量根长，计算生根率。1.2.3　不同生长素种类及浓度对生根的影响　外植体的切取方法同１.２.２，分别接种于添加０.０５、０.１、０.２mg·L－１的NAA（萘乙酸）或IBA（吲哚丁酸）的１／２MS培养基上，以不添加生长素的１／２MS培养基为对照。每处理６瓶，每瓶接种４个外植体。统计项目与方法同１.２.２。1.3　5种菊花近缘野生植物叶片不定芽再

8、生体系的建立1.3.1　不同细胞分裂素对叶片愈伤组织诱导和不定芽分化的影响将无菌苗叶片切成０.５cm×０.５cm左右的小块作为外植体，分别接种到添加不同种类及不同浓度细胞分裂素的MS培养基中（６BA（６苄基腺嘌呤）：０.５、１.０、２.０mg·L－１；KT（激动素）：０.５、１.０、２.０mg·L－１），再添加０.１mg·L－１NAA。每处理６瓶，每瓶接种５个叶片外植体。１５d后统计愈伤组织诱导率，再将愈伤组织转接于相同的培养基中，３０d后统计叶片再生率和增殖系数。愈