过瘤胃体外模型的测定方法

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1、过瘤胃体外模型的测定方法一、体外-人工模拟消化液法1，人工唾液配方(MeDougall，1948)-用来模拟动物口腔，测定过瘤胃前的释放率注：MgSO4（MgC12）准确称取一定质量1.0g(精确至0.0001g)样品放入250ml碘量瓶内，每个样做三个重复，加入200ml人工唾液，溶于少量蒸馏水中定容至1000ml)，盖紧胶塞，在39℃的恒温水浴锅内分别消化0、6和12小时(消化过程中每隔1小时振动1次)，测定溶液中产品的含量，从而求得过瘤胃产品的释放率。（先将除CaCl2以外的物质充分溶解，再将

2、CaCl2溶解后倒入前者溶液中。使用前向其中通入二氧化碳，使其pH在8.2左右。并在39℃的水中温浴30分钟。）ØMcDougallEI.Studiesonruminantsaliva,1.Thecompositionandoutputofsheep’ssaliva.BilchemicalJournal,1948,43:99-109.2，人工模拟瘤胃液、真胃和十二指肠消化液准确称取一定质量(精确至0.0001g)过瘤胃产品，放入50mL具塞试管底部，加入20mL人工模拟消化液(pH为6.6、5.4和

3、2.4的缓冲溶液，分别模拟动物瘤胃、真胃和十二指肠消化道近端的消化液)，盖紧试管塞，在39℃的恒温水浴摇床内消化0、12、24、48小时，取出后冲洗、过滤，滤液定容，测定滤液中产品的含量。计算公式:产品瘤胃释放率(W1)=A2/Alx100%式中:Al-产品中有效成分的含量；A2-产品在pH6.6缓冲溶液滤液中有效成分的含量。产品小肠释放率(W2)=A3/A1x100%式中:A3-产品在pH2.4缓冲溶液滤液中有效成分的含量。产品有效释放率（%）=(l-W1)xW2x100%。ØPapasAM,Sn

4、iffenCJ,MuscatoTV.Effectivenessofrumenprotectedmethioninefordeliveringmethioninepostruminallyindairycows[J].JDairySci,1984a,67:545~552.附：人工肠液的制备磷酸氢二钾胰蛋白酶胰脂肪酶胰淀粉酶氢氧化钠6.8g0.25g9.375g83.3mg调pH注：先将磷酸氢二钾加500ml水溶解，加入胰蛋白酶、胰脂肪酶和胰淀粉酶等，再定容至1000ml，用0.1M氢氧化钠调至适宜pH

5、（6.0-8.0）；二、体外-瘤胃液培养法1，瘤胃液的采集晨饲（6：00）后2小时，由瘤胃内采集足量瘤胃液灌入经预热达到39℃并通有CO2的保温瓶中灌满后，立即盖严瓶口迅速返回实验室，经4层纱布过滤后，持续充入CO2气体5分钟。然后，迅速分装至上述已预热好并通有CO2的培养瓶内，每个培养瓶加20ml瘤胃液，盖紧瓶塞放入39℃水浴摇床培养。2，瘤胃培养底物的制备培养底物组成：淀粉3g，氯化铵0.1729g，无水硫酸钠0.0269g，以上试剂为分析纯。3，瘤胃缓冲液的制备体外批次培养的培养体系为60mL

6、，其中瘤胃液与缓冲液的比例为1：2，培养底物的添加量为0.5g。采取McDougall缓冲液。每10LGIF缓冲液含（g）：98gNaHCO3，93gNa2HPO3，4.7gNaC1，1.2gMgSO4·7H2O，5.7gKCI，0.4gCaC12·H2O。4，测定方法称取胆碱样品lg左右，放入已经加入瘤胃液和培养液的培养瓶中(250ml)，摇动混合，向溶液充CO2，使溶液和试管内空间全部充满CO2，然后盖上带有放气阀门的橡皮塞，将其置于水浴摇床培养(39℃)，设置好摇床频率，分别于2、4、8、16

7、、24h，每个样品取出6个瓶子，倾去上清液，剩余物用自来水冲洗三次，至水澄清，除三个样品用于下一阶段的试验，其余三个样品65℃烘干至恒重(48h)，移至干燥器内15min后称重，进行剩余物中胆碱含量，从而测定瘤胃降解率。三、半体内法-尼龙袋法1，尼龙袋的制作选择孔径为35-50μm(250目-400目)的尼龙布，裁剪成15cmx11cm的长方块，对折，用涤纶线进行双道缝合，制成长x宽为7cmx10cm的尼龙袋。边缘用烙铁熨烫，使其无散边，密封，用油性笔标号，再用自来水冲洗，浸泡50分钟，然后低温烘干

8、至恒重，备用。十二指肠尼龙袋：选择孔径为35~50μm尼龙布，裁成7x6cm的长方形，对折，然后用尼龙线或涤纶线缝双道，制成6x2.5cm尼龙袋。2，实验方法选用永久性瘘管反刍动物，分别测定不同包被产品在3，6，9，12，24h时间点的降解率。每个时间点设3个重复。预饲期14天，试验期4天，每一试验期结束后转入下一期的预饲期。3，尼龙袋消化试验及样品的采集制备将尼龙袋用清水洗净，于65℃烘箱中烘48h，放入干燥器中冷却称重、标号。于每一尼龙袋中准确称取包被产品，每个样