中国驯鹿瘤胃上皮细胞的体外分离培养

《中国驯鹿瘤胃上皮细胞的体外分离培养》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、收稿日期：2013-11-06基金项目：国家自然基金项目（31160491）。作者简介：范燕茹（1988-），女，汉族，内蒙古呼和浩特人，在读博士生，主要从事反刍动物消化道免疫方面的研究。*通讯作者：杨银凤，女，汉族，内蒙古呼和浩特人，教授，主要从事反刍动物消化道免疫方面的研究，联系电话：0471-4309175，Email：julie1963@163.com中国驯鹿瘤胃上皮细胞的体外分离培养范燕茹1，王佩1，金鑫1，王冠玉2，邱凯2，王秀芳2，苏日古格2，余兴邦2，杨银凤1*（1.内蒙古农业大学兽医学院，呼和浩特01001

2、8；2.内蒙古呼伦贝尔市动物疫病预防控制中心，呼伦贝尔021008）摘要：本研究旨在建立驯鹿瘤胃上皮细胞的体外分离及培养方法。将驯鹿瘤胃组织钝性分离得到上皮层；用0.25%Trypsin-0.02%EDTA消化液37℃连续振荡消化上皮组织3h-4h，每消化30min更换新的消化液，从消化第4次起过滤消化液，离心收集细胞，采用含有15%FBS的M199培养液培养和传代；通过显微镜下观察其细胞形态做形态学鉴定以及采取免疫细胞化学的方法检测细胞内的角蛋白CK19做化学鉴定。结果显示，经上述试验方法可以获得能够用于培养的细胞，并将这

3、些细胞成功的进行了原代和传一代的体外培养。通过细胞形态学观察和免疫细胞化学检测，证实所培养的细胞为上皮细胞。本试验结果提示，基本建立了驯鹿瘤胃上皮细胞在体外分离培养的方法。这对体外研究驯鹿瘤胃上皮细胞的生理功能奠定了实验基础。关键词：中国驯鹿；瘤胃上皮细胞；细胞培养中图分类号:文献标识码:A文章编号:TheIsolationandCultureoftheChineseReindeerRumenEpithelialCellsFANYan-ru1,WANGPei1,JINXin1,WANGGuan-yu2,QIUKai2,WAN

4、GXiu-fang2,SURIGu-ge2,YUXing-bang2,YANGYin-feng1*(1.Collegeofveterinary,InnerMongoliaAgriculturalUniversity,Hohhot,010018;2.PreventionandcontrolcenterofInnerMongoliaanimalepidemicdisease,HulunBuir,021008)Abstract:Thisstudyfocusedonestablishingthemethodofisolationan

5、dcultureofreindeerrumenepithelialcellsinvitro.Theepitheliatissuewasbluntlyisolatedfromthereindeerrumentissueandthenweretreatedwith0.25%Trypsin-0.02%EDTAundercontinuousoscillationfor3h-4hat37℃.Thetrypsinisingsolutionwaschangedevery30minutes.Thetrypsinisationwasfilte

6、redfromthe4thtime.ThecellswerecollectedbycentrifugationandthenwereresuspendedinM199Mediumwith15%FBSforcultureandsubculture.TheculturalcellsweretestedwithmorphologyandimmunocytochemistrybyobservatingcellshapeandexaminatingcytokeratinCK19.Theresultsshowedthattheepith

7、elialcellscanbeobtainedbybluntlyisolatedandfractionatedtrypsinisationandthecultureshowedgoodproliferativeabilityinvitroforprimarycultureandthefirstgenerationofsub-culturing.ThetestsofmorphologyandImmunocytochemistryconfirmedthattheculturalcellsbelongedtoepithelialc

8、ells.(Conclusion)Theseresultssuggestedthatwehaveestablishedthemethodofisolationandcultureofreindeer rumen epithelialcells invitro.Thislaidaexperi