骨髓细胞糖原染色标准操作程序

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1、骨髓细胞糖原染色标准操作程序1.检验目的有助于巨幼细胞性贫血与红白血病的鉴别，戈谢细胞与尼曼-匹克细胞鉴别诊断，淋巴肉瘤细胞与Reed-Sternberg细胞鉴别。2.检测原理（包括结果计算）过腆酸是一种氧化剂，能将细胞内含有乙二醇基的多糖类物质氧化而产生双醛基，醛基与Schiff染液中无色品红结合产生紫红色化合物，定位于含多糖类成分的细胞质中。3.性能特征无。4.标本要求（包括病人准备、容器、样本类型等）4.1病人准备：了解病人是否对局麻药有过敏史。凝血因子严重缺陷引起的出血性疾病，穿刺部位有炎症或有畸形，晚期妊娠妇女作骨髓穿刺时要慎重。4.2标本类型：骨髓。4.3标本容器

2、：洁净载玻片。4.4标本存放:4.4.1未检测标本的存放：放于细胞室未检测标本架上。4.4.2已检测标本的存放：骨髓存片柜，保存10年以上。4.5标本运输:室温条件下运输。4.6标本拒收标准：参照《采集手册》。5.仪器和试剂5.1.10g/L过碘酸溶液。5.2.Schiff液：碱性品红1g缓慢加入200ml沸水中，待其冷至50-60°C时加入1mol/L盐酸20ml，再冷至25°C时加入偏重亚硫酸钠(Na2S205)2g使之溶解，放在棕色瓶中，置暗处24h，加入活性炭2g，混匀，过滤，滤液应无色透明，冰箱保存。5.3.亚硫酸水溶液100g/L偏重亚硫酸钠液6ml1mol/L盐

3、酸5ml蒸馏水加至100ml5.4.20g/L甲基绿溶液或苏木素液。6.环境和安全此试剂为体外诊断用，存在一定的刺激性；不要入口，避免和眼睛，皮肤或衣服接触，一旦接触，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟，接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。7.检测前准备在玻片头端贴上标签编号,检测前检查试剂有无过期和变质。8.校准/定标无。9.质量控制无。10.标本检测10.1涂片用95%乙醇固定10min。10.2水洗，晾干。10.3浸入10g/L过腆酸溶液中15-20min。10.4水洗，晾干。10.5置于Schiff液中作用30min。10.6取用亚硫酸水溶液洗3次，每次2min(

4、可省略)。10.7自来水洗5min，晾干。10.820g/L甲基绿溶液复染15min或苏木素液复染5mino。水洗，晾干，镜检。10.9为鉴别糖原或其他物质，可在氧化前用唾液处理标本，再进行染色。被淀粉酶消化则为糖原否则为其他物质。10.10结果判断：细胞质出现红色颗粒、块状或弥漫状红色为阳性。阳性强度参考标准:-：细胞质无色，无颗粒;+：细胞质淡红色，或少量红色颗粒;2+：细胞质红色，或10个以上红色颗粒;3+：细胞质染红色，或有粗大颗粒，可出现红色块状;4+：细胞质紫红色或有粗大块状。11.生物参考区间一般原粒细胞呈阴性反应，早幼粒细胞以下随着细胞成熟而阳性增强，成熟中性

5、粒细胞最强；嗜酸性粒细胞颗粒不着色，细胞质阴性，嗜喊性粒细胞阳性。原淋巴细胞阳性程度低，随着细胞成熟阳性程度稍增加。单核细胞仅有少量、细小颗粒。幼红细胞为阴性。巨核细胞和血小板为阳性。12.危急值无。13.临床意义13.1.幼红细胞PAS染色强阳性除见于红血病及红白细胞病外，也可见部分严重缺血性贫血、重型地中海贫血及一些铁粒幼细胞性贫血，若能排除贫血有的为弱阳性，巨幼细胞性贫血和再生障碍性贫血一般为阴性，有助于巨幼细胞性贫血与红白血病的鉴别。13.2急性粒细胞白血病的原粒细胞PAS染色阴性或弥漫淡红色阳性；急性淋巴细胞白血病的原、幼淋巴细胞为红色颗粒状或块状阳性，少数为阴性反

6、应；急性单核细胞白血病的原、幼单核细胞为红色细颗粒、胞质边缘及伪足处颗粒明显，分化差的原单核细胞为阴性；急性巨核细胞白血病的原巨核细胞为红色颗粒、块状阳性或强阳性。13.3.戈谢细胞与尼曼-匹克细胞鉴别：前者强阳性，后者阴性或弱阳性。13.4.淋巴肉瘤细胞与Reed-Sternberg细胞鉴别：前者阳性，后者为阴性或弱阳性。14.注意事项（干扰、潜在变异、超检测范围结果的处理等）14.1过碘酸的质量要保证，氧化时间应严格掌握。14.2不同品牌的碱性品红染色效果不一，其质量是试验成败关键因素之一。14.3Sehiff试剂中偏重亚硫酸俐的浓度较重要，此药易于分解，若药物变性则不能

7、使用。14.4活性碳可以多加，以便吸附红色。14.5SchilT试剂应避光保存，若溶液变红，弃去不用。14.6所用染色缸及器皿宜清洁干燥。14.7染好的涂片不宜久置，放久逐渐褪色。15.参考文献15.1《全国临床检验技术操作规程》（第4版）16.记录表格无