鸡新城疫病毒强毒株的分离鉴定及其遗传变异分析

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1、鸡新城疫病毒强毒株的分离鉴定及其遗传变异分析【中文】本研究从河北、北京、天津等发病鸡群中分离到8株新城疫病毒，其代号分别为TJ／99、SJZ／99、YQ／01、TS／01、ZD-1／02、ZD-2／02、ZD-3／03、BT／03，经鸡胚终点稀释法克隆纯化后，对其进行了形态学观察和毒力指数(MDT、ICPI、IVPI)测定。电镜观察可见8株分离株呈圆形、线形和不规则形，病毒粒子表面有纤突样结构，各毒株大小不同，粒子直径或长轴在100～500nm之间。毒力指数测定结果显示，8株NDV的MDT在42.9～49.5h之间，ICP

2、I在1.93-2.00之间，IVPI在2.68～2.89之间，表明8株NDV均为新城疫病毒强毒株。对上述8株分离株以及LaSota、F_(48)E_8、SF、BJ、QH_8/79、SH_7/99等共14株NDV的F蛋白裂解位点附近的基因进行了克隆和同源性分析。结果发现：(1)疫苗用毒LaSota株同其它13种强毒株之间的同源性在85.0％～89.8％之间，普遍较低；国内标准强毒F_(48)E_8株与LaSota株及国内分离毒株的同源性在90％左右(89.1％～90.4％)；国内分离株之间的同源性在88.2％～99.4％之间

3、，不同毒株之间的同源性有高有低。(2)F_(48)E_8株F蛋白的裂解位点为~(112)RRQRRF~(117)，而其它12株强毒株F蛋白的裂解位点为~(112)RRQKRF~(117)，符合强毒株裂解位点的特征，同毒力测定结果相一致。应用DNAStar软件对上述克隆测序的14株NDV及从Genebank上下载的国内外有代表性的33株NDV等共47株NDV的F基因233bp(157～389bp)长度的核苷酸片段及其相应的氨基酸序列(53～130位氨基酸残基)进行了比较，建立了系统发育树，并确定了8个分离株及SF、BJ株的基

4、因型。结果表明：(1)所有NDV分离毒株的F基因都没有碱基的缺失和插入，但有多处点突变，分散存在。(2)分离株的55～61、72、84～89及128～130之间的氨基酸均高度保守，突变的氨基酸位点多集中在101～111之间。(3)ZD-1／02、ZD-2／02、ZD-3／02、BJ、YQ／01、TJ／99同鹅源的NDV株JS01-5-GO、ZJ00-1-GO及JS98-3-GO株在系统发育树上的距离较近，说明当今鸡ND的流行同鹅的ND有着密切的关系。(4)BJ、SF、TJ／99、YQ／01、TS／01、ZD-1／02、ZD

5、-2／02、ZD-3／03等8株为基因Ⅶ型，SJZ／99和BT／03为基因Ⅵ型，表明河北、北京、天津等地区ND的流行以新的基因Ⅶ型的为主，但同时又有旧基因Ⅵ型的存在，说明ND的流行情况比较复杂，给ND的防制工作带来了一定的难度。在以上生物学试验及遗传变异分析的基础上，本研究对分离鉴定的8株NDV及LaSofa、F_(48)E_8、QH_8/79、SH_7／99等共12株NDV，采用固定病毒，稀释血清的方法，进行交叉血凝抑制试验和鸡胚交叉中和试验。结果表明，LaSota同强毒株之间的相关系数较低，在5.89％～48.41％之

6、间。强毒株之间相关系数除去个别的几个相对较低外，大部份都在25.12％～186.19％之间。将交叉中和试验和遗传变异分析的结果相结合，进行综合分析，结果说明疫苗毒LaSota株同现今流行毒株之间确实存在一定的抗原性差异性。另外可以看出同一基因型之间的相关系数较高，如属于基因Ⅵ型的SJZ／99和BT／03的相关性为114％，属于基因Vn型的毒株之间的相关系数在25.12%~186.19%之间，从一定程度上表明基因型同抗原性存在着一定的相关性，但没有明显的规律。若要彻底弄清基因型同抗原性的相关关系，就必须进一步做交叉保护试验来

7、验证。