血细胞分析复检标准操用程序

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1、血细胞分析复检标准操作程序1.检验目的通过显微镜检查，核实仪器出现的各类报警是否真实存在，有无原始及幼稚细胞，有无血细胞形态异常，有无小红细胞、红细胞碎片、微小血凝块、巨大血小板、血小板聚集等，并估计白细胞、血小板数量，必要时对结果进行校正后才能发出报告（如有核红细胞存在时对白细胞计数进行校正），提高血细胞分析结果的可信度，避免一些血液病的漏检。2.检测原理（包括结果计算）瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成。伊红通常为钠盐，有色部分为阴离子。亚甲（美蓝）为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构。通常为氯盐

2、，即氯化美蓝，有色部分为阳离子。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料（即天青）。将适量伊红、美蓝溶解在甲醇中，即为瑞氏染料。瑞氏染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫红色，称为嗜中性物质。3.性能特征无4.标本要求4.1病

3、人准备：标本采集前患者处于安静状态，避免剧烈运动、情绪激动。4.2标本要求：4.2.1标本种类：静脉全血或末梢血全血2ml放入含有EDTA-K2的抗凝管中，立即将试管轻轻颠倒混匀5-8次。4.2.2标本存放：收集后的标本应该尽快检测，4小时检测完毕。EDTA抗凝血在室温可稳定8小时；保存24小时后由医院按感染标本统一处理。4.2.3标本拒收：样本标识不清楚、标识错误、与申请单内容不符合、采血管不正确等。血液凝固、血量少于0.5ml。5.仪器和试剂5.1试剂名称：瑞姬氏染色液pH6.5磷酸盐缓冲液稀释液5.2试剂来源

4、：自配试剂厂家供应5.3试剂准备：试剂为即用式。5.4试剂贮存：室温保存5.5试剂组成瑞姬氏染色液：瑞氏染料0.5g、姬氏染料0.5g，加入500ml甲醇中，混匀溶解后备用。pH6.5磷酸盐缓冲液：磷酸二氢钾0.3g、磷酸氢二钠0.2g，加入100ml蒸馏水中溶解。6.操作步骤6.1检测前准备检测前检查试剂有无过期和变质；玻片是否洁净。6.2校准/定标无6.3质量控制无6.4标本检测程序6.4.1复检规则项目复检条件处理方法WBC、RBC、Hb、PLT、Ret超出线性范围稀释标本后重新测定。WBC：首次结果<3.0

5、或>30.0×109/L涂片镜检PLT<80或>1000.0×109/L涂片镜检平均红细胞体积（MCV）<75或>105fl（成人）涂片镜检平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）>参考范围上限380g/L检查标本是否有脂血、溶血、RBC凝集，再涂片镜检有无球形红细胞MCHC：<300g/L，同时，MCV>80fl；寻找可能因静脉输液污染或其他标本原因。DC无白细胞分类计数结果或结果不全无条件复检涂片镜检和人工分类中性粒细胞绝对计数（Neut＃）：首次结果<1.0×109/L或>20.0×涂片镜检109/L淋巴细胞绝对计

6、数（Lym＃）：首次结果>5.0×109/L；涂片镜检单核细胞绝对计数（Mono＃）首次结果>1.5×109/L涂片镜检嗜酸粒细胞绝对计数（Eos＃）首次结果>2.0×109/L涂片镜检嗜碱粒细胞绝对计数（Baso＃）首次结果>0.5×109/L涂片镜检WBCIP报警白细胞异常散点图涂片镜检WBCIP报警未成熟粒细胞报警涂片镜检WBCIP报警核左移报警；涂片镜检WBCIP报警异形淋巴细胞、异常淋巴细胞或原始细胞报警:涂片镜检WBCIP报警原始细胞报警:涂片镜检WBCIP报警异形淋巴细胞、异常淋巴细胞或原始细胞报警:

7、涂片镜检WBCIP报警有核红细胞报警涂片镜检PLTClump报警血小板聚集报警涂片镜检新生儿新生儿标本涂片镜检LUC%＞5%涂片镜检6.4.2操作方法：（1）稀释样本；超出线性的样本用EPK稀释液，稀释相应的倍数（不超过10倍），上机检测后得出的结果，乘以稀释倍数即可。（2）涂片镜检：挑选出需镜检的标本，在玻片近一端1/3处，加一滴(约0.05ml)充分混匀的血液，握住另一张边缘光滑的推片，以30°-45°角使血滴沿推片迅速散开，快速、平稳地推动推片至载玻片的另一端。血膜完全干燥后即进行瑞姬氏染色，加瑞姬氏染液数滴

8、，以覆盖整个血膜为宜，固定血膜约1分钟。滴加约等量的缓冲液与染液混合，室温下染色5-10分钟，用流水冲去染液，待干燥后镜检。首先，在低倍镜进行浏览，观察有无异常细胞和细胞分布情况。然后在100倍油镜下，观察细胞浆的颗粒和核分叶情况。检查从约50%的红细胞互相重叠区域开始，向红细胞完全散开的区域推移。采用“城垛式”方法检查血涂片。观察白细胞、红细胞及血小板的数