血细胞形态检测标准操作程序

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1、血细胞形态检测检测标准操作程序1.检验目的与原理1.1检验目的：白细胞、血小板有无数量及质量异常；红细胞形态异常改变。1.2检验原理：瑞氏染色原理：瑞氏染料中含有美蓝和伊红两种染料，前者为碱性，后者为酸性，它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力，使其显现出不同的色调，以便于辨认。细胞核染色质的核酸与强碱性的组蛋白、精蛋白等，形成核蛋白，这种强碱性物质与瑞氏染料中的酸性染料伊红有亲和力，故染成红色；但核蛋白中还有少量的弱酸性蛋白及其氨基，它又与瑞氏染料中的美蓝起作用，只因其量太少，而不显蓝色，故细胞核呈紫红色。较幼稚细胞之胞浆和细胞核之核仁含有酸性物质，与瑞氏染

2、料中的碱性染料美蓝有亲和力，故染成蓝色；当酸性物质各半时，则染成红蓝色或灰红色，即所谓多嗜性。2.样本收集和贮存2.1原始样本系统：全血。2.2标本类型：EDTA抗凝血2ml,标本的采集应使用标准一次性采血管，充分混匀，勿震荡。2.2保存条件：EDTA抗凝血在室温可稳定24小时；收集后的标本应该尽快检测,4小时检测完毕。3．试剂泉州市第一医院检验科标题：血细胞形态检测检测作业指导书文件编号：QZYY/JYK-SOP-XY-2072版本号：1修改号：0生效日期：2015-07-01发行部门：质量管理组编制人：陈锦审核人：吴一波批准人：张志珊页码：第2页共5页3.

3、1瑞氏染液：3.1.1试剂成分：瑞氏染料1.0g无水甲醇500ml甘油10ml3.1.2瑞氏染液配制方法：将瑞氏染料称量好后，放在乳钵中加少量无水甲醇匀速研磨至溶解，将研磨好的染液倾倒入试剂储存瓶中，倒入无水乙醇继续研磨，反复多次，直至乳钵中无瑞氏染料沉淀为止，染液试剂瓶存满为止。将配制好的染液放在36℃24小时后方可使用，放在阴凉干燥处，避光保存。3.2磷酸盐缓冲液PH6.43.2.1脱水Na2HPO41份:处理方法将Na2HPO4于蒸发皿上干燥(火燃烘烤）成粉末称量。3.2.2无水KH2PO42.6份：将脱水Na2HPO41份和水KH2PO42.6份充分混

4、合，边研磨边混匀。3.2.3将上述粉末1g加溶解于500ml去离子水中，混合均匀，方可使用。3.3器材：载玻片、加样枪、吸头、推片器4.仪器显微镜OLYMPUS型号：CX21。4.1开机前检查4.1.1OLYMPUS显微镜：检查显微镜光路系统，目镜、物镜镜头正常，聚光器、光圈、螺旋、微螺旋调节正常。4.2日维护：每日清理纤维镜表面，保持显微镜光圈、聚光器干净整洁；每日下班前无水乙醇（二甲苯少用，有致癌性）清洗所有显微镜物镜（低倍镜10，高倍镜油镜）、目镜。5.操作步骤5.1取材：EDTA抗凝静脉血、耳血、手指血5.2血涂片制备：取耳血或指血静脉血一滴置于载玻片

5、一端，用推片以30～450均匀推成厚薄适宜，头体尾清楚、长度3～5cm的血膜（血膜边缘距1cm左右），注意：耳血手指血第一滴血要去掉，静脉血要充分混匀后吸取适量涂片。5.3瑞氏染色：（1）将制好的血涂片放在染色架上，加瑞氏染液4～5滴，静置1分钟左右，加磷酸盐缓冲液6～8滴，洗耳球混匀染液，染色约10～15分钟，水流轻轻冲掉染液，吸水纸吸干血涂片上的水分，晾干待检。5.4镜检5.4.1低倍镜观察：血涂片先在低倍镜下观察，查看染色是否满意，中、尾部细胞分布情况，如破损细胞过多，细胞涂片不合格，需要重新涂片检查；观察全片有无血凝块，出现血小板聚集成堆可能血液标本不

6、合格，需要重新采血检查，低倍镜下主要用于：估计白细胞和血小板数量上的变化，增高/明显增高，偏低或极度减低，观察低倍镜下全骗有无幼稚细胞。5.4.2油镜观察：选择细胞分布均匀的部位进行分类100个白细胞，主要包括中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞五类细胞百分比，常见的异常细胞主要有:原始/幼稚细胞、异形淋巴细胞、有核红细胞等；高倍镜下观察血小板数量和质量上的变化，血小板聚集成堆，畸形血小板等。5.5报告书写，内容包括：5.5.1红细胞形态改变：常见有红细胞大小不等、小红细胞、大红细胞，中心淡染区扩大，嗜多色红细胞，豪焦氏小体，有核红细胞等

7、。5.5.2白细胞分类及形态改变。分类100个白细胞是否见有核红细胞。5.5.3：血小板数量和形态改变。5.5.4：诊断意见：描述血细胞有无异常形态改变。6.质量控制参加每年卫生部3次形态学室间质评工作7.检验结果报告检验报告审核完毕，门诊和病房报告单在指定处打印。8.参考范围血细胞形态无明显异常。9.临床意义病理性增多：①中性粒细胞：急性化脓感染、粒细胞白血病、急性出血、溶血、尿毒症、急性汞中毒、急性铅中毒等。②嗜酸性细胞：过敏性疾病，如支气管哮喘、寄生虫病、某些传染病。如猩红热、某些皮肤病如湿疹、某些血液病如嗜酸性粒细胞白血病及慢性粒细胞白血病等③碱性细胞

8、：慢性粒细胞白血病转移癌及骨髓纤维化等