异常红细胞形态检测标准操作程序

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1、异常红细胞形态检测检测标准操作程序1.检验目的与原理1.1检验目的：检查红细胞异常改变：大小异常，形态异常，染色异常，结构异常。1.2检验原理：瑞氏染色原理：瑞氏染料中含有美蓝和伊红两种染料，前者为碱性，后者为酸性，它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力，使其显现出不同的色调，以便于辨认。细胞核染色质的核酸与强碱性的组蛋白、精蛋白等，形成核蛋白，这种强碱性物质与瑞氏染料中的酸性染料伊红有亲和力，故染成红色；但核蛋白中还有少量的弱酸性蛋白及其氨基，它又与瑞氏染料中的美蓝起作用，只因其量太少，而不显蓝色，故细胞核呈紫红色。

2、较幼稚细胞之胞浆和细胞核之核仁含有酸性物质，与瑞氏染料中的碱性染料美蓝有亲和力，故染成蓝色；当酸性物质各半时，则染成红蓝色或灰红色，即所谓多嗜性。2.样本收集和贮存2.1原始样本系统：全血。2.2标本类型：EDTA抗凝血2ml,标本的采集应使用标准一次性采血管，充分混匀，勿震荡。2.2保存条件：EDTA抗凝血在室温可稳定24小时；收集后的标本应该尽快检测,4小时检测完毕。泉州市第一医院检验科标题：异常红细胞形态检测检测作业指导书文件编号：QZYY/JYK-SOP-XY-2073版本号：1修改号：0生效日期：2015-0

3、7-01发行部门：质量管理组编制人：陈锦审核人：吴一波批准人：张志珊页码：第2页共6页3．试剂3.1瑞氏染液：3.1.1试剂成分：瑞氏染料1.0g无水甲醇500ml甘油10ml3.1.2瑞氏染液配制方法：将瑞氏染料称量好后，放在乳钵中加少量无水甲醇匀速研磨至溶解，将研磨好的染液倾倒入试剂储存瓶中，倒入无水甲醇继续研磨，反复多次，直至乳钵中无瑞氏染料沉淀为止，染液试剂瓶存满为止。将配制好的染液放在36℃24小时后方可使用，放在阴凉干燥处，避光保存。3.2磷酸盐缓冲液PH6.43.2.1脱水Na2HPO41份:处理方法将N

4、a2HPO4于蒸发皿上干燥(火燃烘烤）成粉末称量。3.2.2无水KH2PO42.6份将脱水Na2HPO41份和水KH2PO42.6份充分混合，边研磨边混匀。3.2.3将上述粉末1g加溶解于500ml去离子水中，混合均匀，方可使用。3.3器材：载玻片、加样枪、吸头、推片器。4.仪器显微镜OLYMPUS型号：CX21。4.1开机前检查4.1.1OLYMPUS显微镜：检查显微镜光路系统，目镜、物镜镜头正常，聚光器、光圈、螺旋、微螺旋调节正常。4.2日维护：每日清理纤维镜表面，保持显微镜光圈、聚光器干净整洁；每日下班前无水乙醇

5、（二甲苯少用，有致癌性）清洗所有显微镜物镜（低倍镜10，高倍镜油镜）、目镜。5.操作步骤5.1取材：EDTA抗凝静脉血、耳血、手指血。5.2血涂片制备：取耳血或指血静脉血一滴置于载玻片一端，用推片以30～450均匀推成厚薄适宜，头体尾清楚、长度3～5cm的血膜（血膜边缘距1cm左右），注意：耳血手指血第一滴血要去掉，静脉血要充分混匀后吸取适量涂片。5.3瑞氏染色：（1）将制好的血涂片放在染色架上，加瑞氏染液4～5滴，静置1分钟左右，加磷酸盐缓冲液6～8滴，洗耳球混匀染液，染色约10～15分钟，水流轻轻冲掉染液，吸水纸吸

6、干血涂片上的水分，晾干待检。5.4镜检5.4.1低倍镜观察：血涂片先在低倍镜下观察，查看染色是否满意。5.4.2油镜观察：选择细胞分布均匀的部位观察红细胞形态学上的异常改变，主要包括以下四个方面：A红细胞大小异常：大小不等，大红细胞（直径＞10um），巨红细胞（直径＞15um），小红细胞（（直径＜6um)。B红细胞形态异常：球形红细胞、椭圆形红细胞、靶形红细胞、镰形红细胞、口形红细胞、泪滴形红细胞、棘形红细胞、皱缩红细胞、锯齿红细胞、裂片红细胞或红细胞缗钱。C染色异常：红细胞着色过浅、着色过深、嗜多色红细胞。D红细胞结

7、构异常：嗜碱性点彩红细胞、卡波环、豪-周小体和和碎片、有核红细胞。当出现以上典型的红细胞异常改变时，需要报告在检验单上。5.5报告书写，内容包括以上四个方面的异常改变。5.5.4：诊断意见：描述红细胞有无异常形态学改变。6.检验结果报告检验报告审核完毕，门诊和病房报告单在指定处打印。7.参考范围红细胞形态无明显异常改变。8.临床意义8.1红细胞大小异常，可用于贫血的分类和鉴别诊断，如巨幼细胞性贫血，缺铁性贫血，恶性贫血等。8.2红细胞形态异常，用于临床疾病的辅助诊断，如：球红细胞用于遗传性球形红细胞增多症、自身免疫性溶

8、血性贫血、异常血红蛋白病（Hbs及HbC病等）；椭圆形红细胞用于遗传性椭圆形红细胞增多症；靶形红细胞用于地中海贫血、血红蛋白病（血红蛋白C、D、E、S病等）泪滴形红细胞用于骨髓纤维化。8.3红细胞染色异常：着色过浅多见于缺铁性贫血、地中海贫血；着色过深多见于先天性溶血性贫血及大细胞贫血患者；嗜多色红细胞多见于增生性贫血，如急性溶血