中药材知母中皂苷类成分的分析

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1、中药材知母中有效成分分析概述中药化学袁航药材概述理化性质化学成分结构含量测定检识鉴别体内代谢知母·概述【植物来源】：百合科植物知母AnemarrhenaasphodeloidesBge.的干燥根茎【本草考证】：首载于《诗经·尔雅》《神农本草经》将其列为中品“味苦寒，主消渴，热中，降邪气，肢体浮肿，下水，补不足，益气……”【功效】：清热泻火、滋阴润燥【临床应用】：烦热消渴、热性病高烧、肺热咳嗽、结核病发热、糖尿病、大便干燥皂苷【数量】：知母中现已有文献报道的甾体皂苷成分约有40种【含量】：在根茎中含量约为6%【分类】：据皂苷元的母核不同可分为螺甾烷类皂苷和呋甾烷类皂苷两大类。螺甾

2、烷类：以菝葜皂苷元连接不同的糖链构成的知母皂苷A，如皂苷A-Ⅰ,A-Ⅲ等；马尔可皂苷元、新吉托皂苷元、薯蓣皂苷元等及其与糖组成的皂苷呋甾烷类：知母皂苷B，如知母皂苷B-Ⅰ、知母皂苷B-Ⅱ、知母皂苷B-Ⅲ等，知母皂苷E1、E2、N、O，知母皂苷H1、H2、I1、I2【结构差异】：3-位羟基连接的糖链19-位的取代基（-OH或-OCH3）双键的位置（Δ5,6,Δ18,19）22-位取代基有无【药理作用】：防治老年痴呆症、保护脑缺血损伤、抗凝血、抗氧化、抗肿瘤、抗骨质疏松、抗炎、降血压、降血糖及降血脂等药理活性。黄酮双苯吡酮类黄酮化合物：芒果苷、新芒果苷、异芒果苷等一类四羟基吡酮的碳

3、酮苷龙胆科、藤黄科，百合科植物抗氧化、抗肿瘤、抗炎、降糖、抑菌，清热作用的主要有效成分甾体皂苷：1、苷元结晶性好，易溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙醚等有机溶剂2、皂苷多为无定性粉末，易溶于热水，稀醇3、均具有旋光性，多为左旋4、具有溶血性5、皂苷的乙醇溶液可与甾醇形成难溶的分子复合沉淀物6、颜色反应：L-B,R-H反应可与三萜皂苷进行区分双苯吡酮类：水溶性较差结构修饰：将芒果苷3-位酚羟基转化成3-ONa在4-位引入磺酸钠基，制备得芒果苷磺酸钠盐理化性质2010版药典中中药知母TLC鉴别指标成分芒果苷知母皂苷B-Ⅱ前处理稀乙醇，超声20min30%丙酮，超声20min薄层板类型聚酰胺

4、薄膜板硅胶G薄层板展开剂乙醇-水（1:1）正丁醇-冰醋酸-水（4:1:5）显色365nm紫外光香草醛硫酸试液，105℃加热至斑点清晰薄层色谱法薄层色谱法纯度鉴别：知母皂苷A-Ⅲ和知母皂苷C正丁醇-醋酸乙酯-水（4∶1∶5，上层）氯仿-甲醇-水（65∶35∶10，上层）醋酸乙酯-乙醇-水（9∶2∶1）3种色谱系统均显单一的蓝色斑点10％磷钼酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰香草醛（3-甲氧基-4-羟基苯甲醛）-浓硫酸显色剂是薄层色谱广泛使用的一种通用显色剂应用：在挥发油、萜类、甾类和皂苷等中药成分的薄层分离中，多能显示出颜色各异的斑点未改进配制：含有1%香草醛的浓硫酸溶液缺点：粘度高

5、喷显困难，往往使显色点呈“花斑状”，模糊不清易将薄层表面喷散，对薄层扫描定量影响很大改进方法：将浓硫酸中加入一定量的水以降低其粘度结果：70%或60%的硫酸配置的显色剂，对样品显色的灵敏度、显色速度和呈色稳定性与浓硫酸配制基本相同。现配制方法：1g的香草醛加到60%的硫酸100ml中（1%）15g香草醛+250ml乙醇+2.5ml浓硫酸（5%）5g香草醛，用10%硫酸乙醇100ml（无水乙醇）（5%）显色剂变革知母总皂苷老鼠灌胃知母皂苷B-Ⅱ和知母皂苷B-ⅢHPLC-ELSD-MS皂苷在血液中含量少不需要对照品，可直接用分子量进行定性分析高灵敏度、高专属性知母大部分皂苷结构相似

6、血样中内源性物质干扰比较大梯度洗脱：流动相为乙腈:水(含0.3%甲酸)0~10min,5%~20%乙腈10~15min,20%~23%乙腈15~25min,23%乙腈25~50min,23%~100%乙腈50~60min,100%乙腈知母皂苷入血成分研究样品前处理：30ul血浆样本，<<文献用量提取：乙腈蛋白质沉淀法流动相选择：乙腈∶1mmol·L-1乙酸铵溶液(30:70，V:V)色谱柱：AgilentZorbaxSB-C18柱(4.6mm×150mm，5μm)峰型好，分离度佳分析时间长AlltimaHPC18柱(2.1mm×50mm，5μm)良好峰型缩短分析时间：t（知母皂

7、苷B-Ⅱ）=1.78mint(重楼皂苷，内标)=1.96min分析周期3min血液中知母皂苷B-Ⅱ测定甲醇蛋白沉淀提取知母皂苷B-Ⅱ在甲醇体系中C-22的羟基与C-22甲氧基易互变乙腈蛋白沉淀提取含量测定指标成分：2005版之前药典：菝葜皂苷元2010版药典：芒果苷和知母皂苷B-ⅡHPLC-ELSDHPLC-MS薄层色谱扫描法酶联免疫法显色剂-UVHPLC-ELSD皂苷类成分大多数无紫外吸收，所以对其皂苷类成分的含量测定，目前报道常用ELSD显示器和示差折光法测定。蒸发光散射检测器是比较好的