cd137-cd137l的相互作用对vsmcs钙化的影响

《cd137-cd137l的相互作用对vsmcs钙化的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、摘要目的：木研宄观察在建立小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化模型的基础上，检测小鼠VSMCs表面CD137及CD137L表达水平的变化，并探讨CD137-CD137L相互作用对小鼠VSMCs钙化的影响及其相关作用机制。方法：采用改良组织贴块法培养小鼠VSMCs,体外P-卄油磷酸钠高磷诱导法快速制作VSMCs钙化模型，冯库萨(vonkossa)染色及比色法鉴定及检测细胞内Ca2+含量。RT-PCR和流式细胞术分别检测细胞表面CD137、CD137L表达水平的变化。RT-PCR和WesternBlot分别测定细胞内NFATclmRNA及蛋白含量。结

2、果：(1)血管组织贴块培养第3-5天时，发现少量细胞由组织块边缘爬出，7-10d后细胞可融合成片；免疫荧光染色可见胞浆内特异性a-平滑肌肌动蛋白表达阳性，第2代VSMCs纯度达95%。(2)与对照组细胞相比，钙化组细胞表面钙含量和ALP活性明显堉加，且呈时间依赖性(P<0.05)。(3)正常对照组VSMCs表面CD137及CD137L微表达，钙化组较对照组相比CD137及CD137L表达明显增加(p<0.05)。(4)在细胞钙化的基础上，用CD137-FC特异性刺激CD137-CD137L轴后，细胞表面钙含量明显上调；给予Anti-CD137L特

3、异性阻断CD137-CD137L轴可显著降低细胞表面钙禽量。(5)体外给予CD137-FC刺激CD137-CD137L轴后，钙化细胞内NFATclmRNA和蛋白含量明显上调，其中刺激时间以12h最佳；Anti-CD137L阻断该轴后能显著降低细胞内NFATclmRNA及蛋白的表达水平，抑制时间12h最佳。结论：(1)p-甘油磷酸钠在体外可右效诱导小鼠VSMCs钙化。(2)CD137-CD137L和互作用可影响小鼠VSMCs钙化的形成，并能调节小鼠VSMCs内NFATcl的表达。关键词：CD137,CD137L,NFATcl,钙化Theeffect

4、ofCD137-CD137LinteractionontheVSMCscalciflcationAbstractObjectiveThisstudywastoestablishacalcificationmodelofmousevascularsmoothmusclecells(VSMCs)anddetectCD137andCD137Lexpression.WealsoinvestigatedtheeffectofCD137-CD137LinteractionontheVSMCscalcificationandtherelatedmechanis

5、m.MethodsTheprimaryVSMCswereharvestedbymodifiedtissue-pieceinoculation.ThecalcificationmodelwasestablishedbyB-glycerophosphateinvitro.Calcificationofcellswasassayedbyvonkossastainingandcolorimetrymethod.TheexpressionofCD137andCD137LmRNAandproteinweredetectedbyRT-PCRandFlowcyt

6、ometry，respectively.RT-PCRandWesternblotarefortheexpressionofNFATclincalcifiedVSMCs.Results(1)VSMCsmigratedfromexplantsofmouseaortatissueafter3-5daysofculture.After7-10days,VSMCsgrewtoformafusingmonolayer.ImmunofluorescencestainingwithspecificmAbagainstmousea-actindemonstrate

7、dVSMCswerepositive.Thecellpurityofthe2ndgenerationofVSMCswasover95%.(2)Comparedwiththecontrolgroup，thecalciumcontentandALPactivityinthecalcificationgroupwereincreasedsignificantlyandintimedependence(P<0.05).(3)ComparedtothenegativelyexpressionincontrolVSMCs，CD137andCD137Lwere

8、positiveexpressedincalcifiedcells(P<0.05).(4)Aftercalcification，thec