脑肿瘤干细胞放射敏感性的实验研究

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1、脑肿瘤干细胞放射敏感性的实验研究【】目的评价脑肿瘤干细胞（braintumorstemcell,btsc）与胶质瘤细胞系shg44细胞放射敏感性的差异。方法shg44细胞分别接种于含10％胎牛血清的dmem/f12培养基和无血清的dmem／f12培养基(添加bfgf和egf)中。cd133免疫细胞化学染色鉴定btsc。0、0.5、1、2、3、4、6、8、10、20gyx线照射shg44细胞和btsc后以流式细胞仪检测两种细胞的细胞周期及细胞凋亡率，绘制shg44细胞和btsc的存活曲线。结果shg44细胞中存在btsc，后者能在无血清的

2、dmem／f12培养基中存活并悬浮生长，增殖形成克隆球，具有自我更新和增殖能力，表达特异性标志物cd133。两种细胞在x线照射后细胞周期无明显差异，btsc的细胞凋亡率低于shg44细胞(p0.05)，细胞存活率高于shg44细胞(p0.01)。结论btsc的放射敏感性较shg44细胞明显降低，是胶质瘤放疗抵抗的主要原因。【关键词】脑肿瘤干细胞；shg44细胞；胶质瘤；放射敏感性experimentalresearchofradiosensitivityforbraintumorstemcellkejin1,hejie2（1.depart

3、mentofoncology,zhongdahospital,southeastuniversity,nanjing210009,china；2.departmentofpathology,fourthpeople′shospitaloforstemcell(btsc)andhumangliomacelllineshg44cell.methodsshg44em/f12supplementedfreedmem/f12containingbfgfandegfrespectively.btscmunocytochemistricalstainin

4、getryassayinedbythemeasureofcellcloneformation.resultsshg44cellcontainedbtsc,eansofsuspensioninserumfreemediumandproliferateintotheclonalsphere.theclonalspheresmaintainedstrongabilityofselfrenearkercd133couldbeexpressedbybtsc.afterbtscandshg44celletryassayshoationinbtscai

5、ncauseofgliomaradioresistence.keyorstemcell；shg44cell；glioma；radiosensitivity（modernmedicaljournal,2009,37:192194）脑胶质瘤(neurogliocytoma)是最常见的颅内原发性肿瘤，占中枢神经系统肿瘤的60%以上，无论放疗、化疗还是手术治疗，恶性胶质瘤患者的中位生存期只有14.6个月［1］。.133229.放疗是脑胶质瘤最有效的治疗手段之一，但由于肿瘤的放疗抵抗性使得相当一部分患者在放疗后出现复发。最近研究发现，脑肿瘤中存在具有自

6、我更新特性的细胞亚群即脑肿瘤干细胞(braintumorstemcell，btsc)，是引发肿瘤并维持其生长的根源，并在肿瘤的复发过程中起着决定性作用［2］。放疗失败的原因可解释为放射线并没有将肿瘤干细胞全部杀死,存活下来的肿瘤干细胞具有无限增殖能力,能继续促进肿瘤生长。本研究旨在探讨btsc在胶质瘤放疗抵抗性中的作用及其可能的机制。1材料和方法1.1材料胶质瘤细胞系shg44细胞（上海中国科学院），dmem／f12(1∶1)培养基(南京天为公司)，胎牛血清（杭州四季青公司），胰蛋白酶(sigma公司)，人表皮生长因子(egf，peprotec

7、h公司)，人碱性成纤维生长因子(bfgf，peprotech公司)，兔抗cd133多克隆抗体（abcam公司）。1.2方法1.2.1shg44细胞的培养和传代shg44细胞接种于含10％胎牛血清的dmem/f12培养基中，在37℃、5％co2的饱和湿度培养箱中培养。5～7d后按1∶2或1∶3的比例传代。1.2.2btsc的培养和传代shg44细胞接种于含egf（20ng·ml1）和bfgf（20ng·ml1）的无血清dmem/f12培养基中，在37℃、5％co2的饱和湿度培养箱中培养。待btsc增殖形成干细胞球3、4d后，吸取上清液体培

8、养基(含细胞球)重新吹打成单细胞悬液，按1∶2或1∶3的比例传代。1.2.3btsc的鉴定用btsc的特异性标记物cd133进行免疫细胞