抗病毒治疗的新方法：rna干扰

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1、抗病毒治疗的新方法：RNA干扰黄小妹（湖北黄石普仁医院湖北黄石435002）【中图分类号】R329.2+3【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）23-0006-02【摘要】RNA干扰技术己经迅速的被发展成为一种治疗手段，用于特异的下调基因从而减轻病痛。这一技术特别适用于由于病毒感染的疾病。现在大量的研宄己经表明无论在体内还是在体外，RNA干扰都可以抑制病毒。这里有一个基木原则：每一个的病原物RNA干扰治疗都必须量身定做，其中包括：1.发挥干扰的RNA的导入方法途径，2.给药途径，

2、3.目的基因，4.RNA干扰作用的持续时间。尽管对于每种病毒都可以制定有效的策略似是他们都面临着同样的挑战。重要的是，治疗策略必须考虑到在病毒基因组可能出现的极快速进行，以及利用计算和生物信息学方法来辅助治疗策略以防止病毒逃逸。此外，所有的RNA干扰治疗策略都需将发挥干扰作用的核酸序列导入到靶细胞中，这将受益于基因设计和导入方法的发展。这里我们总结了在抗病毒RNA干扰方面取得的重要进展，讨论如何将这些发现有效的应用到诊断治疗中。【关键词】RNA干扰病毒治疗RNA干扰（RNAi）是一种特异的抑制基因表

3、达的一种现象，并且是从植物到人中都普遍存在的一种非常保守的机制。在这个过程中细胞内复合物Dicer将双链RNA分子切割成为21-25bp的小分子双链RNA,这些短的干扰RNA（siRNA），然后指导RNA诱导干扰复合体（RISC）切割与之互补的目的mRNA[l,2]。这里我们讨论将RNA干扰技术应用到病毒类疾病中所遇到的难题，以及其应用前景。基于RNA干扰的治疗有很多潜在的优点，但是也有很多的难题。病毒复制非常快，会积累突变和短的缺失，特别是基因组为RNA的病毒。由于RNA干扰依靠siRNA与目的m

4、RNA的精确互补，因此突变的积累会致使病毒呈现出对RNA干扰的抑制，这种情况类似于病毒进化对HAARP治疗产生抗性。此外，在病毒复制，dsRNA编码病毒蛋白或整个基因组产生的过程中病毒都奋可能是暴露在宿主细胞的RNA干扰作用下。因此，许多病毒进化出RNA干扰的抑制因子并不奇怪，这种现象在植物中比动物中更具特征性。人类病毒具有的RNA干扰抑制因子将会影响抗病毒RNA干扰治疗的策略。1发挥作用的核酸的导入方法一般来说，应该根据目的病毒的生命周期和病理来设计RNA干扰的片段和导入方法。一种方法是导入合成的

5、siRNA,另一种方法是导入能生成siRNA或shRNA的质粒或病毒载体。siRNA的合成很快，但是只能产生瞬吋的抑制作用。这个方法对于病毒性传染病是很适用的。导入表达载体则可以冇较持久的抑制效果，这个方法对于慢性传染病比较适用。此外，必须把发挥作用的核酸导入到0的病原物存在和复制的组织中，这点和疫茁类似。此外，对于导入的RNA干扰的核酸也必须定量，而这个量必须是体外和体内试验确定的。慢病毒载体作为表达shRNA的载体，可以通过增加苏剂量提高抑制0的基因的表达。冇效核酸的导入一直是基因治疗的重要难题

6、，因此所冇的运载工具都将受益于合成和病毒载体的发展。除了有效核酸的低导入率会影响效果外，还奋一些方面会限制宿主能承受的最大RNA干扰的计量。要克服这些副作用的-•种方法就是限制在这些感染细胞中RNA干扰作用。利用RNA聚合酶II型启动子的shRNA表达载体可以通过病毒感染来激活可调控的启动子。2病毒耙点的选择对于某一特定的病毒，当试图用基于RNAi的治疗方法吋，最重要的考虑因素是该病毒独特的生活周期。首先，可以根据这些病毒基因组的类型将它们进行分类。对于DNA病毒，只有唯一的选择，就是将病毒的mRN

7、A作为靶点。然而，当靶病毒是正链RNA病毒吋，由于mRNA和基因组RNA具奋序列相似性，它们会同吋被降解。当靶病毒是负链RNA病毒时，情况就变的更复杂。对于在细胞质中复制的RNA病毒，将病毒表达的RNA结合蛋白作为靶标，会得到更好的效果。一方面可以抑制新病毒的产生，另一方面还会使基因组RNA更容易被切断。3病毒的进化将病毒基因作为RNA干扰的靶标奋一个缺陷，那就是病毒的突变会导致RNA干扰的失败。总的来说，将病毒基因作为RNA干扰对象要比细胞内基因作为对象更能影响病毒的复制。此外，将抑制细胞内基因应

8、用为治疗手段之前,先要彻底阐明其潜在的安全性，即使该基因的表达完全被抑制也不会产生奋害作用。同样的，这种方法特别适合在将来发展成为一种在空间和吋间上能进行调控的RNA干扰策略。另一种策略即同吋将几个序列作为RNA干扰的靶点，但是病毒的进行也会使该策略失效。这种组合型的策略就是HIV的HAART处理的基础。事实上，组合型的RNA干扰可能会比单一靶点的RNA干扰效果更好。4展望总的来说，自从RNA干扰在哺乳动物细胞中被阐明的短短几年中，在将RNA干扰应用到抗病毒治疗中已经