生物组织中还原性糖、脂肪、蛋白质的鉴定

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1、生物组织中还原性糖、脂肪、蛋白质的鉴定1.实验原理某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。（1）还原糖+斐林试剂砖红色沉淀（现用现配）还原糖：葡萄糖、果糖、麦芽糖（蔗糖、淀粉等是非还原糖）（2）脂肪+水浴加热苏丹Ⅲ染液苏丹Ⅳ染液镜检镜检橘黄色红色双缩脲（NH2-CO-NH-CO-NH2）是两个分子脲（即尿素）经180℃左右加热，放出一个分子氨（NH3）后得到的产物。（3）蛋白质+双缩脲试剂紫色双缩脲反应即在碱性溶液（NaOH）中，双缩脲能与铜离子（Cu2+）作用，形成紫红色络合物。双缩脲试剂用于通过双缩脲反应检测双缩脲，因蛋白质中也有-CONH-基

2、也可用于检验蛋白质，与蛋白质接触后的颜色呈紫色。（4）淀粉+碘液蓝色2.实验步骤：（1）还原糖的鉴定111（2）脂肪的鉴定取材：花生种子浸泡3～4h，将子叶削成薄片制片镜检：在低倍镜下找到已着色的花生子叶最薄处然后用高倍镜观察结论：脂肪能被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色或被苏丹Ⅳ染成红色①取最理想的薄片②染色：滴2～3滴苏丹Ⅲ染色3min或苏丹Ⅳ1min③去浮色：1～2滴50%的酒精④制成临时装片：吸、滴、盖（3）蛋白质的鉴定113.实验注意问题（1）实验材料的选择在物质的鉴定实验中,选择无色或颜色较浅的材，以避免材料本身颜色的干扰。（2）物质鉴定的实验一般不设立对照组（自身前后对

3、照），若设立，对照组应加入成分已知的物质（标准对照）。辨析比较斐林试剂与双缩脲试剂的比较分析比较项目斐林试剂双缩脲试剂不同点使用方法甲液和乙液混合均匀后方可使用，且现配现用使用时先加A液再加B液呈色反应条件需水浴加热不需加热即可反应反应原理还原糖中的醛基被Cu(OH)2氧化,Cu(OH)2被还原为Cu2O具有肽键的化合物在碱性条件下与Cu2+反应生成络合物颜色砖红色紫色浓度乙液CuSO4浓度为0.05g/mLB液CuSO4浓度为0.01g/mL相同点相同点都含有NaOH、CuSO4两种成分，且所用NaOH浓度都是0.1g/mL(2)盐酸可改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入

4、细胞，同时使染色质中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。实验：观察DNA和RNA在细胞中的分布2．实验流程冲洗涂片：用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片10s3．实验现象及相关结论现象结论绿色明显集中且接近细胞中央DNA主要分布于细胞核中绿色周围的红色范围较广RNA广泛分布于细胞质中实验结果示例材料选择1.生物实验选材基本要求:①符合实验要求②易获取的原则③不对实验结果产生干扰2.本实验选材初步分析：真核细胞（如：洋葱鳞片叶表皮细胞，人的口腔上皮细胞等。该实验不宜选用绿色植物的叶肉细胞。）本实验的注意事项(1)几种液体在实验中的作用①0.9%的NaCl溶液：保持口腔上皮

5、细胞正常形态②8%的盐酸：a.改变细胞膜的通透性b．使染色体中DNA与蛋白质分离③蒸馏水：a.配制染色剂；b.冲洗载玻片(2)关于甲基绿和吡罗红溶液的配制：甲基绿吡罗红染色液包括A液和B液，使用时现用现配。