扎西中胡椒碱含量测定色谱条件的研究

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1、扎西中胡椒碱含量测定色谱条件的研究【】目的：确定扎西中胡椒碱含量测定理论的色谱条件。方法：采用高效液相色谱法。结果：扎西中胡椒碱的含量为2.49mg/g。结论：方法操作简单，重现性好，专属性强，可作为扎西含量测定方法。　　【关键词】扎西；高效液相色谱法；胡椒碱　　　　扎西为传统蒙药验方，是由光明盐、荜茇、诃子、大黄等九味药组成的复方制剂主治温胃、消食、解毒、化积、解痉，用于消化不良，药物、食物中毒，胃痉挛，胃腹胀满。荜菝为处方中的主药,有止血生肌，收湿敛疮之功效。文献记载[1]荜茇主要含有胡椒碱，参照中国药典2010版一部中荜茇项下的含量测定方法，选择胡椒碱作为指标成分，对

2、本制剂中的荜茇进行了HPLC含量测定方法研究。经分析方法验证，表明该方法重现性好，专属性强，方中其它组分对胡椒碱的测定无干扰，故以胡椒碱作为测定指标，作为扎西含量测定方法。　　1仪器与试药　　1.1仪器岛津LC—2010AHT高效液相色谱仪，LCsolution工作站，sartoriousBP211D型电子天平。UV—1700紫外分光光度仪。　　色谱柱色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，本实验研究采用KromasilC18柱（250mm×4.6mm，5?m）　　1.2试剂与试药胡椒碱对照品（中国药品生物制品检定所批号：0775—200203，供含量测定用）；扎西（批号：20

3、081223、20090115、20090211）由兴安盟科右中旗蒙医院提供；模拟样（20100105-1，20100105-2）自制；甲醇为色谱纯，水为高纯水，其它试剂均为分析纯。　　2试验方法及结果　　2.1考察因素及水平根据有关文献报道，扎西含量的考察因素为提取时间，超声处理30分钟、40分钟和50分钟胡椒碱的含量基本一致，故超声提取时间定为30分钟。　　2.2流动相的选择：参照中国药典2010年版一部“荜茇”含量测定项下胡椒碱的测定方法，以甲醇—水（77:23）为流动相进行流动相条件摸索。结果供试品色谱中的胡椒碱具有较好的分离度，理论板数较高，并具较适宜的保留时间，

4、故作为检测流动相。　　2.3扎西中胡椒碱的含量测定。　　2.3.1检测波长的选择：精密称取胡椒碱对照品适量，用无水乙醇制成1ml含17?g的溶液，在200～700nm波长范围扫描。结果胡椒碱在344.0nm、345nm处有最大吸收。参照中国药典2010年版一部“荜茇”含量测定项下胡椒碱的测定方法，选择343.0nm作为检测波长。　　2.3.2理论板数的确定从多批检测数据可见，胡椒碱的理论板数在3000以上即能达到较好的分离效果，考虑到不同的色谱柱具不同的理论板数，故确定理论板数按胡椒碱峰计算应不低于2000。　　2.3.3对照品溶液的制备：精密称取胡椒碱对照品7.77mg，

5、置100ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1、2、4、6、8和10ml，分别置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度.　　2.3.4标准曲线的绘制将上述标准品系列溶液，分别用微孔滤膜过滤，弃去初滤液，收集续滤液于进样瓶中，进样10μl，每份进样2次，甲醇—水(77：23)为流动相；检测波长343nm，以峰面积为纵坐标，胡椒碱浓度为横坐标做线性回归，得回归方程：Y=7.6211X-7.8091，R2=0.9999。胡椒碱在7.77～77.70μg/ml范围内呈良好的线性关系。　　2.3.5样品液的含量测定供试品溶液的制备：取本品粉末1g，精密称定，置100ml量

6、瓶中，加无水乙醇70ml，超声处理30分钟，放冷，用无水乙醇定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。　　样品含量测定（不同品种）取本品专属性项下的供试品溶液的制备方法处理并测定，三批样品（20081223、20090115、20090211）的测定结果分别为2.876mg/g、2.855mg/g、2.884mg/g。　　阴性对照试验：按上述方法制备供试品溶液和对照品溶液。另取按处方比例并以相同方法制备的缺荜菝的阴性对照供试品，按供试品溶液制备法制得阴性对照溶液。在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、阴性对照溶液、供试品溶液各10ul，分别注入液相色谱仪，测得结果为：阴性对照色

7、谱图中在与胡椒碱对照品以及供试品色谱图相对应的保留时间处无色谱峰出现，表明其他组分对胡椒碱的测定无干扰。　　2.3.6溶液稳定性试验溶液稳定性试验取同一份供试品溶液，分别在0h、4h、8h、12h、24h进行测定，结果胡椒碱在24小时内的峰面积积分值基本稳定不变，RSD为0.50%。　　2.3.7精密度重复性试验取同一批号样品（批号：20090211）6份，研细，精密称取1.0g，分别按供试品溶液的制备项下的方法操作，测定每份供试品的含量，平均含量为2.874mg/g，RSD为0.42，说明本方法重复性良好。　　2