维生素c的定量测定实验报告

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1、HOHOClCl2,6•二氯酚靛酚（魟色〉CHaOHHO—CHCH^OH脱氢抗坏血酸还原型2今二氯酚擊»＜无色）生物化学实验报告维生素C的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）一、实验目的掌握2,6-二氯酚錠酚滴定法测定维生素C的原理和方法二、实验原理维生素C又称抗坏血酸。在1928年从牛的肾上腺皮质中提出的结晶物质,证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，因此称为抗坏血酸。H—CIHO—CHI还原型抗坏血酸还原型抗坏血酸能还原染料2,6-二氯酚錠酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸性溶液中，2,6-二氯酚靛酚呈红色，被还

2、原后变为无色。因此，可用2,6-二氯酚錠酚滴定样品中的还原型抗坏血酸。当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。如无其他杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量呈正比。三、实验器材1、松针、菜椒、大枣；2、取液器3、容量瓶100ml4、微量滴定管5ml5、电子天平6、研钵、烧杯数只7、漏斗两个四、实验试剂1、2%草酸溶液：称取草酸8.031lg，溶于400ml蒸馏水中；2、1%草酸溶液：称取草酸4.0254g，溶于400ml蒸馏水屮；3、标准抗坏血酸溶液；4、1%

3、HCI；5、0.1%2,6-二氯酚靛酚溶液。五、实验操作1、样品的提取松针：从南京大学教学楼前摘取的新鲜松针，用水清洗干净，吸去表面的水。准确称取2.0004g，放在研钵中加入1%HC1溶液5ml—起研磨，研细。放置片刻,将提取液转入100ml容量瓶屮，如此反复几次加入提取液。最后用l%HCr溶液定容，混匀，（每10ml样液中含松针0.20004g）静置lOmin,过滤，备用；菜椒和大枣：用水洗浄，吸去表面水分。准确称取得大枣2.0025g、菜椒1.9963g。分别加2%草酸10ml于研钵中，研细，转移提取液于100

4、ml容量瓶中并用2%草酸溶液定容。（这样，每10ml样液中含冇枣0.20025g,或者菜椒1.9963g）静置lOmin,过滤，弃去最初几毫升滤液，备用；2、滴定标准抗坏血酸溶液：准确吸取标准抗坏血酸溶液1.0ml加9ml1%草酸在100ml锥形瓶中，微量滴定管以0.1%2,6-二氯酚靛酚滴定至淡红色，并保持15s即终点；样品滴定准确称取10.0ml样品溶液，放入100ml锥形瓶屮，用与标准抗坏血酸溶液滴定相同的方法滴定；六、数据记录标准维生素C松针大枣菜椒2,6-二氯酚靛酚/ml0.260.571.120.480.

5、260.561.110.48七、数据计算由标准液滴定数据求出lml染料相当于多少mg抗坏血酸:T=0.1mg/0.26ml=0.385mg/ml计算每100g样品中含抗坏血酸的质量公式：m=^-xlOO州o其中：m100g样品中含抗坏血酸的质量；V滴定时所用去染料的体积数；T每毫升染料能氧化抗坏血酸质量数，O.385mg/ml；m010ml样液相当于含样品之质量数。松针：m=0.565x0.385+0.20004xlOO=108.7m^/l00g大枣：m=1.115x0.385-0.20025x100=214Amg/

6、100t?菜椒：m=0.48x0.385+0.19963x100=92.6mg/1QQg八、实验讨论与注意事项1、维生素C是人体必需的营养素，其生理功能首先是作为酶的辅因子或辅助底物参与多种重要的生物合成过程，0前己知至少冇8种酶保持高度活性需要维生素C。其次，维生素C作为抗氧化剂可清除02-、OC13-、OH-、NO-、NO2-等自由基，在保护DNA、蛋白质和膜结构免遭损伤方面起着重要作用。因为维生素C可以医治坏血病，因此乂叫抗坏血酸。维C主要存在于蔬菜和水果中，通常水果大都以生食为主，维C损失甚少，而蔬菜绝大多数

7、在食用前需加热熟制，会导致维C不同程度的丢失。在所冇维生素中，水溶性的维C最不稳定，在收获、加工、烹饪及贮藏期间容易被破坏，特别是在有02存在或光、热、碱性环境中极易被破坏。近年来，发现它还有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有化学致癌物的阻断作用。维生素C是具有L系糖型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。2、维生素C具有很强的还原性。它可分为还原性和脱氢型。金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为

8、脱氢型。根据它具有还原性质可测定其金属含量。3、整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过2min。滴定所用的染料不应小于lml或多于4ml，如果样品含维生素C太高或太低时，要酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。4、干扰滴定因素有：若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，可用白陶土脱色，或加lml氯仿，到达终点时，氯仿