hplc测定核黄素磷酸钠中核黄素的含量

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1、HPLC测定核黄素磷酸钠中核黄素的含量　　关键词:核黄素；核黄素磷酸钠；HPLC　　Abstract:ObjectiveTodeveloptheassaymethodsofriboflavininriboflavinsodiumphosphate.MethodsHPLCmethodineriboflavininriboflavinsodiumphosphaten.Themobilephaseconsistedofacetonitrile-0.02mol/Lpotassiumdihydrogenphosphate(67∶33)(adjustedthesolutionetricdetector,

2、excitation,emission.ResultsRiboflavinhadagoodlinearity(r=0.9999)L.Theaveragerecoveryethodisaccurate,sensitiveandrapid.　　Keyphosphate；HPLC核黄素磷酸钠中国药典［1］、美国药典［2］、英国药典［3］均有收载。中国药典没有对有关杂质进行测定，美国药典和英国药典均采用非极性的C18柱进行分离测定。但由于核黄素的极性小，保留时间较长，整个分离分析约需45min，另外峰较宽，检测灵敏度较低。本文采用高效液相色谱法对核黄素磷酸钠的有关杂质核黄素进行含量测定，采用极性的N

3、H2柱，用荧光检测，核黄素的保留时间约2.9min，峰锐，大大缩短了分离分析的时间，方法灵敏，结果准确。　　1仪器与试药　　岛津LC―10AT液相色谱仪，带SIL―10AT自动进样器，RF―10AXL荧光检测器，Classvp5.0色谱工作站。　　核黄素对照品为美国药典参考标准(USPR.S.)由广州药物研究中心提供。核黄素磷酸钠，批号：03704(由顺德南方生物制药有限公司提供)；批号：040118―1、040118―2(由珠海生物化学制药厂提供)。乙腈为色谱用试剂，磷酸二氢钾为分析纯试剂，稀盐酸按中国药2005年版二部配制，水用纯水器制备的高纯水。　　2方法与实验　　2.1溶液配制　　2

4、.1.1核黄素对照贮备液的制备　　取核黄素对照品约10mg，精密称定，置100mL棕色量瓶中，加36%盐酸0.2mL使溶解后，加水稀释至刻度，摇匀，备用。　　2.1.2对照品溶液的制备　　精密量取核黄素对照贮备液3mL，置25mL棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取2mL，置20mL棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。　　2.1.3供试品溶液制备　　取本品约10mg，精密称定，置50mL棕色量瓶中，加水6mL使溶解后，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取2mL，置20mL棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇篮匀。　　2.2测定方法　　2.2.1色谱条件　　色谱柱：NucleosilN

5、H25μm(150mm×4.6mm)；流动相：乙腈0.02mol/L磷酸二氢钾(67∶33)用稀盐酸调pH5.3；流速：1.0mL/min；荧光检测，激发波长：445nm；发射波长：520nm。　　在上述色谱条件下，分离核黄素和核黄素磷酸钠的色谱图见图1。　　2.2.2测定法　　精密量取对照品溶液与供试品溶液各50μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算核黄素的含量。　　2.3方法验证　　2.3.1专属性试验　　取本品，照“2.1.3”项下方法操作，测定。供试品溶液呈现与对照品溶液主峰保留时间、峰形一致的色谱峰。经供试品溶液与对照品溶液混合分离，以及调整流动相再分离，核黄素

6、对照品主峰与供试品呈现相应的色谱峰始终重叠，峰形也没广东药学院学报，2006，22(1)第1期邓洁雄.HPLC测定核黄素磷酸钠中核黄素的含量有改变，证实供试品呈现与对照品主峰保留时间一致的色谱峰为核黄素的色谱峰。　　2.3.3重复性试验　　制备两份对照品溶液，每份进样3次，结果核黄素的平均响应值为2.5609×10-7，RSD=0.7%。　　2.3.4加样回收试验　　取已测定核黄素含量的核黄素磷酸钠约8mg，精密称定，置50mL棕色量瓶中，制备6份，其中5份分别精密加入核黄素对照品贮备液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0mL，按供试品溶液制备自“加6mL水……”起，同法操作，测定。按加样

7、回收计算回收率，结果见表1。表1加样回收测定结果（略）　　2.3.5样品测定　　按对照品溶液的制备与供试品溶液的制备和测定方法，测定3批样品，结果见表2。表2样品测定结果（略）　　3讨论　　3.1从样品色谱图可见，除核黄素和核黄素磷酸钠主峰外，在2.5、4.9、5.3、6.2、15.6、20.3min还可见分出6个色谱峰，这与核黄素磷酸钠存在核黄素二磷酸盐和不同取代位的单磷酸盐相关。对于它们的归属，由于缺少对