hplc法鉴别大黄及部分含大黄中成药的真伪

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1、HPLC法鉴别大黄及部分含大黄中成药的真伪【关键词】高效液相色谱法；河套大黄；土大黄苷；清肺抑火片国家药典规定，正品大黄于蓼科，属于掌叶组植物的干燥根及根茎。以个大，色黄而得名。品种包括掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄，主产地在四川、青海、甘肃等地，栽培或野生，产量并不大[1]。伪品大黄主要波叶组的波叶大黄，包括河套大黄、华北大黄、藏边大黄等，主产地在华北、新疆、西藏、青海等地。波叶组的伪品大黄产量大，流散广，市场中较为常见，但其并非药典收藏的正品大黄，因此均属伪品。正品大黄具有攻积滞、清湿热、泻火、凉血、祛瘀、解毒等功效，是临床较为常用的一种药品。而伪品大黄则不具备这样的功

2、效。目前由于正品大黄产量有限，市面上涌现出大量伪品大黄以假乱真、以次充好，严重干扰医疗市场，甚至威胁患者的生命健康，因此，鉴别大黄真伪至关重要。正品大黄无论从宏观还是微观，甚至理化性质检测结果均与伪品大黄有着很大区别，鉴定的方法也多种多样。本文采用高效液相色谱法（HPLC法）对大黄真伪进行鉴别，并选取清肺抑火片为含大黄中成药物的代表，鉴定其所含大黄真伪，现报道如下。1方法1．1仪器与试药：仪器：日本岛津（LC-2010A）高效液相色谱仪；TG332A型微量分析天平(上海分析天平厂)。试药与试剂：土大黄苷对照品，批号110756-200110，于中国药品生物制品检定所；河套大

3、黄取自本省药品检验所药材标本室，正品大黄药材购自我省药材公司，上述2种药材均经本所主任药师鉴定。清肺抑火片市售品购自永安大药房，生产厂家云南金柯制药有限公司，批号20094331。1．2色谱条件:色谱柱为LichrospherC18柱(0.25cm×4.6mm，5um)，流动相为甲醇-乙腈-水(35：5：60)，检测波长320nm。流速1mL/min，SYG柱温25℃。1.3对照品溶液的配制:精密称取土大黄苷对照品3.39mg，置25mL量瓶中，以甲醇定容，摇匀，作为对照品溶液。1．4供试品的制备:取正品大黄及河套大黄，研成细粉，精确称取药材1．0g，加入甲醇25ml，超声

4、处理后，过滤，滤渣用少量甲醇洗涤3次，合并滤液和洗液，减压浓缩，残渣加甲醇溶解，转移至100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。取清肺抑火片20片，去包衣后精密称量、研细，再精密称取适量(约相当于2片量)，置锥形瓶中，精密加入25mL甲醇，超声振荡20min，放冷，用甲醇补充至刻度，精密吸取续滤液10mL，即为供试品液。2结果2．1色谱条件及系统适用性:色谱柱：LichrospherC18(150mm×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇-乙腈-水(35：5：60)，流速1.0ml/min，检测波长320nm，色谱图见图1。图1A对照品B河套大黄C正品大黄2．2线性关

5、系:精密称取土大黄苷对照品14mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1mL分别含0．28mg、0．32mg、0．16mg的混合液。作为对照品储备液，各吸取对照品储备液50、100、200、300、400、500、600于5mL量瓶中，用甲醇定容。进样测定，以对照品进样量为横坐标，峰面积分值为纵坐标绘制工作曲线，得到回归方程：Y=0.37+2648.20m，r=0．998。结果表明，土大黄苷进样量在0.316-3.69ug时，峰面积与进样量呈良好线性关系。2．3精密度试验:精密量取对照品溶液，重复进样6次，每次进样量10ul，测得土大黄苷含量，相对标准差

6、RSD为0．28%。2．4加样回收率试验:精确称取已测定的大黄样品5份，每份0.25g，分别精密加入对照品储备液1.3mL，对照储备液1.6mL，按照供试品溶液制备同法操作并按上述条件测定。结果为99.18%，RSD为0.82%。2．5样品稳定性试验:按供试品液制备方法处理，并按色谱条件测定记录色谱图，以外标法峰面积计算RSD为0.61%。结果表明：供试品溶液室温下放置在12小时内稳定。2.6样品测定:取河套大黄样品及清肺抑火片分别按上述方法制备供试品溶液，精密量取供试品溶液及对照品溶液各5uL，注入液相色谱仪，记录峰面积，计算样品中土大黄苷的含量及RSD。结果显示：河套大

7、黄含土大黄苷4.05%，RSD0.41%；清肺抑火片及正品大黄中不含土大黄苷。3讨论大黄是我国特产中药材之一，以四川西部和甘肃的大黄质量上乘，药用价值最好。我国药典规定的符合药用正品的大黄为蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄及药用大黄的干燥根茎和根。近年来，随着中药事业的发展，中药品种逐渐增多，饮片使用数量也日益加大，加之野生大黄逐渐减少，种植栽培的大黄亦不能满足市场需求，导致陆续出现华北大黄、河套大黄、藏边大黄、天山大黄的根伪充大黄的情况，且伪品大黄日益增多。大黄为苦寒泻下之物，其荡涤肠胃、峻下力猛、走而不守，同时也有