倒扣草tlc指纹图谱鉴别及β

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1、倒扣草TLC指纹图谱鉴别及β杨志业1刘文斌21.广东省食品药品检验所，广东广州510180；2.广州市药品检验所一分所，广东广州510130[摘要]目的建立倒扣草TLC指纹图谱及测定药材中β-蜕皮甾酮含量，为控制药材质量提供科学依据。方法利用TLC法建立倒扣草药材指纹图谱，采用RP-HPLC法测定β-蜕皮甾酮含量。结果不同产地倒扣草TLC指纹图谱中显示有6个共有斑点作为倒扣草的特征成分，这6个斑点可用于药材的定性鉴别，不同批次药材中β-蜕皮甾酮的含量差异较大。结论TLC指纹图谱鉴别结合β-蜕皮甾酮含量测定能较全面反映倒扣草药材质量，可用于药材质量控制。

2、[.jyqk×10cm（Merck），自动点样仪（ATS4，CAMAG），薄层色谱成像仪（Reprostar3，CAMAG）；L，超声30min，滤过，滤液蒸干，用乙醇2mL溶解，置中性氧化铝柱（100～200目，4g，内径1~1.5cm）上，用70%甲醇25mL洗脱。收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。2.1.2对照药材溶液制备取倒扣草对照药材粉末（过三号筛）约2g，按“2.1.1”项下制备，即得。2.1.3对照品溶液制备取齐墩果酸对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，即得。2.1.4色谱条件吸取供试品溶液及对照药材溶液

3、、对照品溶液各2μL，分别点于同一薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20:4:0.5）为展开剂，展开8cm，取出，晾干；喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光（366nm）下观察荧光色谱，并摄制图片（图1）。S：齐墩果酸；1~10：样品（No.1~No.10）；11：对照药材。图1倒扣草药材TLC指纹图谱2.2β-蜕皮甾酮含量测定2.2.1色谱条件Kromasil100-5C18色谱柱（250mm×4.6mm，5?m）；流动相：乙腈－0.1%甲酸溶液（13：87）；检测波长为250nm；流速：1ml/min；柱温：30℃；进样量

4、：20?l，理论板数按β-蜕皮甾酮峰计算，应不低于5000。对照品和样品色谱见图2。A：对照品；B：样品；1.β-蜕皮甾酮图2倒扣草药材HPLC图2.2.2对照品贮备液精密称取β-蜕皮甾酮对照品10mg，加甲醇制成浓度为100.34μg/mL的溶液，作为对照品贮备液。2.2.3对照品溶液精密吸取“2.2.2”项下的对照品贮备液1mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得。2.2.4供试品溶液取本品粉末（过三号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加水饱和正丁醇25mL，称定重量，充分振摇后超声（功率300in，放冷，再称定重量，用水饱和正丁醇补

5、足减失的重量，滤过，精密取续滤液10mL，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。2.2.5线性关系考察精密称取“2.2.2”项下的对照品贮备液适量，加甲醇制成每1mL分别含5.017、10.034、20.068、40.136、60.204μg/mL的系列对照品溶液。按“2.2.1”项下色谱条件测定，记录色谱峰峰面积。以进样量（X,ng）为横坐标，以峰面积（Y）为纵坐标，得回归方程：Y=1998.8X-5.9459，r=1.0000。结果表明β-蜕皮甾酮在0.0502～0.6020?g范围内呈良好线性关系。2.2.6精密

6、度试验精密吸取对照品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件连续进样6次，记录峰面积。结果RSD为1.1%，表明仪器精密度良好。2.2.7重复性试验取同一批号的供试品，按“2.2.4”项下方法平行制备6份供试品溶液，分别进样测定。结果β-蜕皮甾酮的平均含量为0.25mg/g，RSD为1.6%（n=6），表明本方法重复性良好。2.2.8稳定性试验取同一份供试品溶液，分别于0，2，5，10，15，24h进样10μL，记录峰面积。结果RSD为0.8%。表明供试品溶液在24h内稳定。2.2.9加样回收率试验取同一批供试品，分低中高3个水平进行加样回收率考察，每个水平

7、各取3份，低水平取样量为0.1g，中水平取样量为0.3g，高水平取样量为0.5g，置具塞锥形瓶中，分别精密加入β-蜕皮甾酮对照品25.09μg，80.28μg，120.41μg。按“2.2.4”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进行测定，计算回收率。结果β-蜕皮甾酮低水平平均回收率为101.4%，RSD为0.4%；中水平平均回收率为100.7%，RSD为1.3%；高水平平均回收率为98.2%，RSD为1.8%。表明该方法回收率良好。结果，见表1。2.2.10样品含量测定取本品，按“2.2.4”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.1”项

8、下色谱条件进行测定，计算样品中β-蜕皮甾酮的含量，结果见表2。表2倒扣草中β-蜕皮甾酮含量测定