心肌细胞培养方法详述

《心肌细胞培养方法详述》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、心肌细胞培养方法详述配液：Hanks液、低糖DMEM液、高糖DMEM液、胰酶消化液、双抗液、碳酸氢钠液、盐酸液。取鼠：鼠盆用棉铺好，取鼠。准备：事先检奔显微镜、磁力搅拌器及离心机是否好用，提前三小时把小牛血清、胰酶、抗生素拿出来化开。其余未冻药品也提前20分钟拿出来缓和一下。新洁尔灭（0.1%）泡纱布（用10ml5%的新洁尔灭加水至500ml即得），消毒地面（1:500的84液）。用酒精棉球擦拭台面后把物品摆放好，幵紫外线灯照30分钟后幵鼓风机吹至实验结束。物品：白大衣、饭盒小剪子、小镊子（4套）（一套剪皮肤、一套开胸取心，一套剔除心缘纤维组织，一套剪碎

2、心脏）瓶皿（2套）［两个小圆培养皿，培养皿内加DMEM液，先后装取出的心和剔出纤维组织后的心］［一个小烧杯装碘酒和酒精棉球］250ml烧杯3个［一个用于水浴，事先加好水，最好是一或二蒸］［一个装0.1%新洁尔灭150ml左右，消毒小鼠］500ml烧杯1个，用作废液缸。50ml烧杯3个（剪碎心肌组织，最后配液）三角烧杯（50ml）+小转子（小转子，酒精擦，双蒸水冲后，再把酒精彻底冲掉后用三角烧杯高压）离心管及帽（12-14个），两个试管吸管（5〜8个）大镊子（两把，持物，例夹棉球等）台面：磁力搅拌器、纱布（事先用于托盘装0.1%新洁尔灭浸泡）、试管架、泡沬

3、塑料板、五个针头（不用消毒）75%酒精棉球及碘酒（消毒棉球，泡酒精、碘酒）大镊子两把（一把夹棉球，一把取鼠）、3个250ml烧瓶（一个装一蒸水，一个装新洁尔灭，另一为空的备用）1个500ml烧瓶（废液缸）、温度计、PH试纸（事先调PH值）、洒精灯、打火机/火柴、载玻片（5-10个）

4、用于培养前看接种密度及消化后看细胞密度］、注射器5ml6个（胰酶、DMEM、小牛血清）1ml2个（双抗液）20ml备用2个、微量加样器1000ml及500ml以上物品均用紫外线照30分钟。另外准备手套、帽子、口罩、24孔培养板、离心机+—把小锁、未冻药品及DMEM、HCL、N

5、aHCO3、小牛血清。事先把显微镜、离心机、磁力搅拌器电源插好。检查酒精灯是否有酒精，碘酒和酒精棉球是否够用。先把物品递入，后穿大衣、帽子和口罩。然后把酒精灯打开，把瓶皿摆好，再用一个瓶皿装酒精棉球。培养过程，1.把两个5ml注射器分别插入DMEM和胰酶中，分别向两个圆皿中加入5ml的DMEM培养液。用一把大镊子从鼠盆里取出一只生后2〜3天的SD大鼠，放入0.1%新洁尔灭浸泡一下后拿出放在泡沫板上，用针头把鼠固定（位置摆正），用另一把大镊子取碘酒棉球擦皮肤，再用酒精棉球脱碘，取一把小剪子及小镊子开皮，充分撕拉开，再用酒精棉球消毒，后换另一把小剪子和镊子在

6、剑突处正中线稍偏左开胸取心。2.取出的心放在刚才准备的一个装有DMEM的圆皿屮再取K一只。重复以上过程。（鼠全部杀死后，把取鼠镊及泡沫板、新洁尔灭缸等拿出台面。消毒、清洁，铺纱布、换手套。1.用第三副剪子和镊子把圆皿中的心脏周边的血凝及纤维组织剔除掉，放在另一个预先装好DMEM的圆皿屮。抽取5ml的胰酶，然后将其屮少许放入50ml的小烧杯中，大部分倒入三角烧瓶中。用第四副剪子将烧杯中的心脏剪成lmm3的碎块，倒入三角烧瓶中（可用剪刀刮入），再用剩余胰酶刷净烧杯。2.把温度计和三角烧杯放入250ml烧瓶中，（事先调好水量，多会没过三角烧杯，少温度会不均匀）

7、。打开磁力搅拌器电源，调温度（使-缓慢加到34-35°C）和转速（转速不可过快，否则会打碎细胞，基本上标志为平行）。一定要注意监控。3.温度达到34°C时开始计时，第一次为10分钟，以后可为8分钟，事情况而定。在此期间，在试管架上摆上5、6个离心管，标上1、1，2、2。其中在1号两管事先加入DMEM液各2毫升4.10分钟后，把三角烧瓶取卜*,磁力搅拌器关上，用一个吸管轻轻吹打（使消化下来的细胞彻底从组织团快上掉下来），这个吸管（1）用后固定放在一个离心管中，以后每次消化后取下都用其吹打儿下，第一次上清弃去，然后向两个1号管分别倒入2ml上清（尽量不要把组

8、织倒出，也不要剩液太多，以免消化下的细胞重复消化造成损伤），用另一个吸管（2）混匀配平两个管（即两个管水平高度相同），轻轻吹打，以免损坏细胞。5.接着把这两个离心管放入离心机中，调10分钟，800或1000转，垫小锁，打开关。6.同时向三角烧瓶中加入5ml胰酶，继续消化8分钟，注意控制温度。此吋向两个2号管中分别加入2mlDMEM液。7.取下三角烧瓶，仍用1号吸管吹打，后静置片刻向两个2号管分别倒入2毫升的上清，取出两个离心后的1号管，把上清液沿细胞贴壁一方慢慢倒掉，后向其中一管加入4ml的DMEM液，用2号吸管取少量液体加入另一个离心管中，把管底的沉淀

9、细胞洗下来，把液体全部移入其中一管，三个管（1个1号管，两个2号管）配平，放入离