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1、临床检验实脸室ABO血型鉴定页码：第1贞，共5页［测定原理］根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及0型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗一A和抗一B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原成/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗一A或/和抗一B。［试剂和仪器］1•批批检的抗一A（B型血）、抗一B（A型血）及抗一A十B（0型血）分型血清。2.批批检的5%A、B及0型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节
2、附注；3.离心机，显微镜。［标本收集与处理］1，受检者血清；2,枸缘酸納抗凝血或未稍取血，受检者血液制成5%红细胞盐水悬液使用，制备方法见本节附注。3,标本山现中度溶血者，为不合格标本，不能用于检测。［操作步骤］1.试管法（1）取洁净小试管（内径10腿X60mm）3支，分别标明抗一A、抗一B和抗一A十B,用滴管分别加抗一A、抗一B和抗一A十B分型血清各1滴（约50ul）于试管底部，再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混和。（2）另取洁净小试管（内径10mmX60min）3支，分别标明A、B和0细
3、胞。用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和0型5%试剂红细胞悬液1滴，泥和。（3）立即以1000r/min离心3min。（4）将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集（或溶血）现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。（5）观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。(6)凝集强度判断标准4十红细胞凝集成一大块，血淸淸晰透明。3十红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。2十红细胞凝块分散成许多小块，见到游离
4、红细胞。1十肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。土镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。ME混合凝集外观(mixedfield)是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。一表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。2.玻片法(1)取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A十B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血淸1滴于标明的方格內，再各加受检者2%红细胞悬液1滴，混和。(2)另取洁浄玻片一张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明A细
5、胞、B细胞和0细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和0型试剂红细胞悬液1滴。(3)将玻片(或白瓷板)不断轻轻转动，使血淸与细胞充分混匀，连续约15min,先以肉眼观察有无凝集(或溶血)反应；再在低倍镜下观察结果。［结果判定］ABO血型正反定型结果分型血清+受检者红细胞受检者血型受检者血清+试剂红细胞抗-A抗-B抗-A十BA细胞B细胞0细胞十—十A-十——十十B十一————0十十—十十十AB—洗：十为凝集;一为不凝集。版序：2017-6［质量控制与附注］1,分型血清必须为批批检试剂，且在有
6、效期14使用；质呈性能符合要求。试剂开封后必须贴上开封日期、开封人标签，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。试剂开封后有效期为一周。2,试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤1次，以除却存在于血清屮的抗体及可溶性抗原。或使用合格的商品诊断红细胞。试剂红细胞有效期：自制的为15天，商品的为试剂有效期。试剂开封后必须贴上开封日期、开封人标签，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。试剂开封后有效期为一周。3,生理盐水启用后，有效期为二周。4,所有试剂在开封或使用时，必须检查是否有变质：凡付疑者，
7、必须更换新的试剂进行检测工作。5,试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。6,操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。7,按理IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以4'C为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温（20—24°C）闪进行试验，37°C可使反应减弱。8,离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。9,观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。10,判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。11，对于
8、可能存在不完全抗原的时候，应在各反应方加入凝聚胺试剂，以检验不完全抗原的存在。12,对于可疑结果，必须更换所用的试剂，重新检测。13,5%红细胞悬液的配制：用生理盐水洗涤红细胞3次。根据下表进行红细胞悬液的配制。悬液浓度（％）压积红细胞（滴）盐水（滴）212m1(40)510.8ml(16)1010.4ml(8)2010.2ml(4)版序：2017-6ABO血型鉴定［正反定型结果不一致的原因］（一）原因：有技术性问题或红细胞和
