法医dna检材chelex

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1、法医DNA检材Chelex-->第1章绪论法医DNA检验技术的主要对象是生物物证，即人的细胞核基因组DNA。法医DNA检材一般分为常量检材、微量检材、接触检材等。常见的常规检材包括人血、唾液和混合斑等。本文中涉及的常量检材主要指血痕和唾液斑。标准的血斑载体包括FTA卡、滤纸、纱布（线）、棉签，部分唾液斑是送检烟蒂。这些常见的载体中，纱布（线）长时间保存DNA的效果较棉签差；棉签不利于DNA分子的释放；滤纸长时间浸泡可能会使溶液中漂浮纸纤维；烟蒂过滤嘴部位的烟纸通常是含色素的；标准FTA卡含有特殊成分，能更大限度防止DNA降解，但纯水浸泡清洗时不容易去除血色素。因此，对不同的检

2、材载体，需要分别研究其最佳提取量；另外，常量检材在提取、保存、送检的过程中可能会存在不同程度的DNA降解、含有各种杂质等现象，所以提取过程中的体系体积、加入的Chelex-100及蛋白酶K的量、消化时间、变性时间，甚至浸泡清洗过程都可能会对提取的DNA模板质量产生影响。Chelex-100提取法的不足之处是原始检材的所有成分，包括蛋白、肝素、血红素以及检材基质中所含的染料等各种杂物都在提取后的DNA液中，有时可能会对DNA扩增产生影响[8]。长时的浸泡、多次清洗往往可能洗除肝素及血红素；但同时清洗检材时可能损失部分DNA，所以应平衡清洗抑制剂与损失DNA之间的关系。但是，由于

3、Chelex-100法有DNA提取时间短、提取方法简便、成本不高，提取过程不换管，减少了可能造成检材污染的环节等优点，同时，在Chelex-100法的基础上还可以对DNA提取进行各种纯化，目前，Chelex-100法已经成为法医DNA提取的基本方法。.........第2章实验材料与方法2.1材料、仪器和试剂为最大限度降低其他条件对实验结果的影响，每个对照组所用的检材及试剂均采用同一的，不同对照组（即编号前两位字母一致的检材）尽量在同一条件、同一时间、同一台机器上进行提取、定量、扩增、电泳。降解检材及腐败检材因DNA含量不定且含有大量DNA扩增干扰物，为提高检验一次成功率一般

4、采用磁珠法，不在本实验讨论范围内。Chelex-100浓度：分别剪取0.2cm×1.0cmFTA血卡溶于100μL5%chelex-100、10%chelex-100、15%chelex-100、20%chelex-100，编为BB组。蛋白酶K：在0.2cm×1.0cmFTA血卡+100μLchelex-100体系中，分别加入3μL、5μL、8μL、10μL、20μL蛋白酶K（PK），编为BC组。56℃消化时间：对0.2cm×1.0cmFTA血卡+100μLchelex-100+10μLPK体系，分别56℃消化30分钟、45分钟、60分钟、75分钟、90分钟，编为BD组。98

5、℃变性时间：对0.2cm×1.0cmFTA血卡+100μLchelex-100+10μLPK体系，分别98℃变性3分钟、5分钟、8分钟、10分钟、20分钟，编为BE组。2.2方法剪取适量生物检材，置于0.5ml离心管内，加入适量纯水，震荡30秒，室温浸泡20分钟[33]，13,000rpm离心5分钟，吸弃上清，管底留约20μl左右液体及检材基质，加入30—150μlChelex-100及PK5-20μl，56℃30至90分钟不等，100℃5-20分钟，10,000rpm离心2分钟，上清备用[34]。取适量唾液斑样品，放入0.5ml的离心管中，加入0.5ml纯水，振荡混匀30秒

6、，室温浸泡30分钟；13,000rpm离心3分钟，去除上清液，保留载体；加入100μl10%Chelex-100溶液和5μlPK，56℃保温1小时，振荡5-10秒；98℃变性15分钟，振荡30秒；13,000rpm离心2分钟，4℃保存备用。扩增效果可能受环境温度、扩增试剂盒存放时间、扩增液混匀程度等因素影响，因此，根据国家实验室认可委（AS）关于DNA实验室认可的相关要求，每次扩增时，应该同时扩增controlDNA（9947）以作阳性对照，观察扩增效果；以扩增纯水作为阴性对照，观察有无体系污染。第2章实验材料与方法.....................152.1材料、仪

7、器和试剂.....................152.2方法.....................22第3章结果与讨论.....................273.1Qubit2.0定量结果.....................273.2电泳结果.....................44第4章结论.....................64第3章结果与讨论3.1Qubit2.0定量结果检材量对照组：将常量生物检材按载体材质分为组，每小组取5个样本尽量保持相同条件进行试验，以观察平均