t细胞检测和荧光pcr检测在结核分枝杆菌检测中的比较

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1、T细胞检测和荧光PCR检测在结核分枝杆菌检测中的比较杨玉前南阳市第六人民医院结核病二区，河南南阳473000[摘要]目的比较T细胞检测和荧光PCR检测两种方法对结核分枝杆菌检测的敏感性、特异性，及在基层结核病防治工作中的应用前景。方法应用结核分枝杆菌荧光PCR检测2013年10月1日—2014年10月1日采集的194份疑似或确诊活动性肺结核空腹痰标本，并与血液T细胞检测结果进行比较。结果荧光PCR法与T细胞检测对结核分枝杆菌检测的阳性率为12.9％和7.7%，确诊率分别为56%和93.3%。结论

2、结核分枝杆菌T细胞检测相比荧光PCR检测的特异性较高，而敏感性相对较差，在临床实践中由于各种干扰因素的存在，两者结合应用可提高结核病的早期诊断率。.jyqkTuberculosisYANGYuqianSecondInpatientAreaofTuberculosis,SixthPeopleacute;sHospitalofNanyangCity,Nanyang,HenanProvince,473000,China[Abstract]ObjectiveToparethesensitivityand

3、specificitybettuberculosis,andtheapplicationprospectingrassroottuberculosisin194fastingsputumspecimensofsuspectedorconfirmedactivetuberculosiscollectedfromOctoberthefirst2013toOctoberthefirst2014,andtheresultstuberculosistuberculosis.Astherearevariou

4、sinterferingfactorsexistingintheclinicalpractice,binativeapplicationofthetethodscanimprovetheearlydiagnosisrateoftuberculosis.[Keytuberculosis;FluorescentPCR;Tcellassay[简介]杨玉前（1978.5-），女，河南南阳人，本科，执业医师，研究方向：结核病的早期诊治。由于结核病是呼吸道传染病且耐药现象日趋严重，目前结核的流行有不断上升的

5、趋势，据资料显示，全世界约有30％的人受到结核的感染，10％的人最终发展为结核病患者，全世界每年新发结核病例1000万，死亡病例300万。一些恶性疾病常易合并各种细菌、真菌及结核等感染[1],因此，结核病防治引起全世界的广泛关注，早期发现可疑的结核病患者并实施有效监控、治疗是卫生工的重要任务[2]。传统的结核实验室诊断技术如痰涂片、培养、鉴定等存在敏感性低或耗时过长等缺点，在实际应用中有一定的局限[3],不利于早期快速诊断。近年来，分子生物学方法开始应用于结核的临床诊断和疗效判定[4-5]。该研

6、究应用结核分枝杆菌荧光定性PCR和T细胞检测两种方法对2013年10月1日—2014年10月1日采集的194名疑似结核病患者痰液和血液标本进行结核分枝杆菌进行快速检测，并做出初步的分析评价，现报道如下。1资料与方法1.1一般资料采集南阳市第六人民医院194名疑似结核病患者，其中男104例，女90例，平均年龄（31.9±5.1）岁。1．2试剂和仪器结核杆菌T细胞检测试剂盒购自北京表源生物技术有限公司，结核杆菌荧光PCR试剂盒采购自广州健仑生物科技有限公司，仪器主要有高速台式离心机，PCR扩增仪，美

7、国TurnerDesigns公司TD-360型荧光仪。1.3方法1.3.1结核分枝杆菌荧光PCR检测操作步骤（1）痰液样本处理：①取病人晨痰，加入2倍体积的4%NaOH，反复振摇，置室温20min，使之充分液化。②取0.5mL液化痰液加至0.5mL离心管内，于高速台式离心机1.4万转/分离心10min，弃上清液。③加灭菌蒸馏水0.5mL于沉淀中，振荡混匀，1.4万转/分离心10min，弃上清液。④重复步骤③。⑤加样品提取液50μL于沉淀中，振荡混匀后，置100℃水浴中15min，取出后，样品管1

8、.5万转/分离心5min，上清液即可作为反应模板。⑥强阳性对照、弱阳性对照和阴性对照不需用NaOH液化，直接从步骤②开始处理。（2）核酸扩增反应：将反应混合液放置于室温后，取出20μL加入含酶反应管中，再加4μL己处理的样品上清（调零管中直接加入20μL反应混合液和4μL样品提取液），混匀后，1万转/分离心20s，上PCR扩增仪循环。（3）荧光检测：①仪器校准：反应管在低于40℃的室温下平衡5min后进行测量。TD-360型荧光仪调零，校正。②样品测定：将从PCR扩增仪中取出的反应管逐一放入荧光