mptp诱导的小鼠帕金森病模型中相关脑区inos时程表达变化

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1、MPTP诱导的小鼠帕金森病模型中相关脑区iNOS时程表达变化：董玉林，张志军，刘娟，郁晓燕，倪衡建【摘要】目的：观察1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶（MPTP）诱导的小鼠急性损伤PD模型中纹状体（CPu）、黑质致密部（SNpc）、额叶皮层联合区（FrA）和腹侧被盖区（VTA）中iNOS基因和蛋白的时程表达变化。方法：用RT-PCR和PTP诱导的小鼠PD模型中相关脑区iNOS基因和蛋白的表达量进行检测。结果：MPTP诱导的小鼠PD模型中SNpc和CPu脑区iNOS基因和蛋白在给药后多个时间点均有显著性表达，其中1d是表达高峰；VTA和FrA脑区

2、iNOS基因和蛋白的表达没有SNpc和CPu脑区表达显著。结论：表达增高的iNOS可能对SNpc和VTA脑区DA能神经元及CPu和FrA脑区的DA能神经元末梢起了损伤作用，从而导致了DA能神经元的减少及其末梢退变的发生。【关键词】帕金森病；1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶；诱导型一氧化氮合酶；小鼠[Abstract]Objective：Toobservethetime-courseexpressionofiNOSmRNAandproteininCPu，SNpc，FrAandVTAoftheMPTPmodelofPD.Methods:Semi-

3、quantitativeRT-PCRandPTPmodelofPD，andapeakRNAandproteinsinVTAandFrAincreasedlessthanthoseinCPuandSNpc.Conclusion:TheincreaseiniNOSexpressionmaydamagethedopaminergicneuronsinSNpcandVTAandthedopaminergicterminalsinCPuandFrA.[Keyethyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine；iNOS；Mouse帕金

4、森病（Parkinson’sdisease，PD）典型的神经病理特征为：中脑黑质致密带（substantianigraparspacta，SNpc）中多巴胺（dopamine，DA）能神经元缺失导致纹状体（caudateputamen，CPu）中DA含量降低，而与其相邻的腹侧被盖区（ventraltegmentalarea，VTA）的DA能神经元却累及较轻[1]。何种分子机制导致PD患者DA能神经元退变至今仍不是很清楚，这也成为有效治疗PD的一大障碍。本课题组之前通过每隔2h按20mg/kg给C57BL/6小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-

5、四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP）1次，共注射4次的方法成功制作了小鼠PD模型，并观察到此模型中SNpc、VTA脑区的DA能神经元胞体以及CPu和额叶皮层联合区（Frontalassociationcortex，FrA）的DA能神经元末梢对MPTP所诱导的毒性反应不同。为证实这一现象是否与这些部位的诱导型一氧化氮合酶（induciblenitricoxidesynthase，iNOS）表达量的不同有关，本文就MPTP诱导的小鼠急性损伤PD模型中SNpc、VTA、CPu、FrA等部

6、位的iNOS基因和蛋白表达的时程变化差异进行探讨。1材料与方法1.1实验动物和主要试剂成年雄性C57BL/6小鼠60只，体重28g左右。由南通大学实验动物中心提供。MPTP（Sigma公司M0896），TrizolReagent（Invitrogen），DNAMarkerDL2000（TaKaRa：D501A），逆转录试剂盒（Fermentas﹟K1622），DNA聚合物，（TaKaRa），Mouse-anti-β-actin（AC-15）（ABCAM公司），Rabbit-anti-NOS2（M-19）（SantaCruz公司），辣根过氧化物酶标记的山羊

7、抗鼠、抗兔抗体（Pierce公司）。1.2实验动物分组RT-PCR实验中我们选取了MPTP注射后6h、1d、3d和14d等4个时间点的小鼠为实验组（24只小鼠），对照组（6只小鼠）注射相同剂量的生理盐水；在PTP注射后12h、1d、3d和14d等4个时间点的小鼠为实验组（24只小鼠），对照组（6只小鼠）注射相同剂量的生理盐水。1.3RT-PCR将小鼠的脑取出后，取FrA、CPu、VTA和SNpc部位脑组织，取材范围：（1）FrABregma3.20~2.80mm；（2）CPuBregma0.98~0.14mm；（3）VTA和SNpcBregma-2.92

8、~-3.64mm，左右对称，用Trizol法提取总RNA，根据逆转录反应试剂盒说