分子生物学实验大全

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1、实验方法大全建立一个良好的、具有示范意义的实验室规范是建立一个优秀实验室的最为基本的、必要的、关键的前题。正文目录正文目录i表格目录ii信息准备1基本鉴定神经活性因子所需项目1冰冻切片1cRNA探针标记1PCRDigProbeSynthesis2DigEasyHyb杂交方案2原位分子杂交(ISH)3RACE实验方案5NorthernBlot&DotBlot6NorthernBlot杂交-mRNA膜杂交6随机引物标记DNA探针(试剂盒:Promega,U1100)7DNA纯化柱制作8RNAMasterBlot放射性探针杂交检测8多组织NorthernBlot放射性探针杂

2、交检测8细菌培养9液体细菌培养9固体细菌培养10菌种的保存10感受态细胞的制备和保存10感受态细胞的制备10感受态细胞的冻存11质粒的提取和纯化11质粒DNA的小量提取和纯化11限制酶酶切反应12质粒的酶切，小量酶解反应12DNA的重组12T-载体连接(T/Acloning)12粘端连接法13平端连接法14平-粘端连接法(定向连接反应)15重组质粒的转化15重组质粒的鉴定17a-互补17插入失活17菌落原位杂交18限制酶酶切分析19琼脂糖凝胶电泳19从凝胶中回收DNA19PCR技术20细胞培养21无菌操作21试剂及材料21细胞的复苏22培养细胞换液22培养细胞的传代2

3、3细胞的冻存23细胞计数23细胞转染24转染质粒的制备24脂质体转染系统24新生大鼠皮层神经元分离与培养24WesternBlot(Immunoblotting)26蛋白质样品的准备26细胞胞浆样品准备26细胞培养上清样品准备26细菌培养菌体蛋白样品准备26SDS-PAGE凝胶电泳26SDS-PAGE凝胶电泳26SDS-PAGE凝胶的考马斯亮蓝染色28SDS-PAGE凝胶的银染29SDS-聚丙烯酰胺凝胶的干燥29转膜30免疫反应30显色31DAB显色31ECL显色31表格目录表格1、信息准备1表格2、RNA探针标记体系1表格3、PCR法Dig探针标记体系2表格4、PC

4、R法Dig探针反应参数2表格5、抗体稀释液3表格6、0.2mol/LNaH2PO43表格7、0.2mol/LNa2HPO43表格8、0.2mol/LPB(pH7.2)(MethodI)3表格9、0.2mol/LPB(pH7.2)(MethodII)3表格10、RACE之PCR反应体系5表格116表格126表格13、随机引物标记DNA探针反应体系7表格14、RNAMasterBlot杂交检测反应体系8表格15、LB液体培养基9表格16、LB固体培养基10表格17、0.1mol/LCaCl2溶液11表格18、TEbuffer配制方案11表格19、双酶切反应体系12表格20

5、、pGEM®-T连接体系13表格21、单次连接反应中PCR产物最低浓度要求13表格22、平端PCR产物加尾体系13表格2314表格2414表格2514表格2615表格27、LB液体培养基配方16表格28、LB固体培养基配方16表格29、SOC培养基配方16表格30、Mg2+stock(2M)16表格3119表格3220表格33、0.25%Trypsin-0.04%EDTA消化液:500ml22表格34、细胞冻存液23表格35、DMEM培养基24表格36、30%凝胶贮备液26表格37、10%SDS27表格38、5×电泳缓冲液27表格39、10%过硫酸胺27表格40、1.

6、5mol/LTris-Cl(pH8.8)27表格41、1.0mol/LTris-Cl27表格42、2×SampleBuffer27表格43、凝胶(分离胶)浓度的选择27表格44、分离胶的制备28表格45、配制Tris-甘氨酸SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳5%浓缩胶所用溶液28表格46、脱色液28表格46、考马斯亮蓝(CommassiseblueR250)染液29表格47、TBS配方(WesternBlot用)30表格48、TBST配方(WesternBlot用)31表格49、Blockingbuffer配方(WesternBlot用)31信息准备表格1、信息准备基本鉴定神

7、经活性因子所需项目范明:118呼2560；孙焕东:118呼7728.基因序列分析；.表达产物纯化分析；.测活系统；.分布//表达谱；.发育变化；.作用类型(何种神经元)；.与其他因子比较(活性)；.转染后测活。冰冻切片器材:尖镊子、DEPC水(替代防冻液)、玻璃吸管(加液体)、单面刀片(修整组织块)、卫生纸(擦拭冷冻台等)。切片最佳温度:-15~20℃，如果组织块表面过冷，切片将变为粉末状不可用，此时可戴乳胶手套用大拇指给组织块表面提高温度。此种处理可对后续的3~5张切片有效。切片时如果防卷板工作不正常，可用左手食指按压协助。cRNA探针标记试剂:.