hplc-elsd法测定甘草中3种甘草皂苷的含量

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1、HPLC?ELSD法测定甘草中3种甘草皂苷的含量：叶静　肖美添，汤须崇，黄雅燕【摘要】目的建立测定甘草药材中甘草皂苷G2、甘草酸铵、乌拉尔甘草皂苷B含量的方法。方法采用HPLC?ELSD法，HypersilC18柱(5μm，4.6mm×150mm)，以甲醇?乙酸铵水溶液(0.2mol/L)?冰乙酸(体积比65∶34∶1)为流动相，流速1.0mL/min，ELSD漂移管温度110℃，载气(N2)流速2.8L/min。结果甘草皂苷G2、甘草酸铵、乌拉尔甘草皂苷B的线性范围分别为6.02～120.4，13.22～264.4，6.32～126.4μg/mL(r值分别为0.9996,

2、0.9997,0.9998),平均回收率(n=6)为100.6%，100.8%和99.87%。结论本法简便，重现性好，可用于甘草中甘草皂苷G2、甘草酸铵、乌拉尔甘草皂苷B含量的测定。【关键词】甘草;甘草皂苷G2;甘草酸铵;乌拉尔甘草皂苷B;HPLC?ELSDAbstract:ObjectiveoestablishaquantitativemethodfordeterminingthecontentofsaponinG2,ammoniumglycyrrhizinateanduralsaponinBinGlycyrrhizauralensis.MethodHPLC?ELSDme

3、thodplesn(5μm,4.6mm×150mm)byusingmethanol?0.2mol·L-1ammoniumacetate?glacialaceticacid(65∶34∶1)asmobilephase.ThefloL·min-1andthetemperatureofdrifttubein-1.ResultsThelinearrangesofsaponinG2,ammoniumglycyrrhizinateanduralsaponinBL-1,respectivelyandtheiraveragerecoveries(n=6)ethodisconvenient,

4、reliableandcanbeusedforanalyzingsaponinG2,ammoniumglycyrrhizinateanduralsaponinBinGlycyrrhizauralensis.　　Keymoniumglycyrrhizinate;uralsaponinB;HPLC?ELSD　甘草是豆科植物GlycyrrhizauralensisFisch的干燥根茎和根,是常用且重要的中药材,具补脾和胃、益气复脉之功效[1]。现代研究发现甘草具有祛痰、止咳、利胆、解痛、降胃酸、抗炎、抗溃疡、抗肝毒素以及抗癌等药理作用[2]。近年来还发现其具有体外抗甲肝病毒、人体

5、免疫缺陷病毒和SARs病毒的活性,临床上用于治疗慢性肝炎和艾滋病[3,4]。我国野生甘草主要生长在“三北”地区，尤其是内蒙古、甘肃、新疆、宁夏分布较多。甘草中主要有效成分为甘草皂苷类和黄酮类化合物[5]。有关甘草有效成分分离测定，文献报道的有TLC法[6]、GC法[7]和HPLC法[8],为了更好地控制甘草的品质，本文采用HPLC?ELSD法测定甘草中3种皂苷类成分甘草皂苷G2、甘草酸铵、乌拉尔甘草皂苷B的含量。　　1仪器与试药　　ShimadzuSPD?10AVP高效液相色谱仪(配备CBM?102色谱工作站)，AlltechELSD2000型蒸发光散射检测器，超纯水器(M

6、ilipore)。　　甘草药材购自江西省樟树药材市场，经本实验室鉴定;甘草皂苷G2、甘草酸铵和乌拉尔甘草皂苷B对照品为本试验室用制备型HPLC分离而得,经IR、MS、1H?NMR、13C?NMR等手段(方法)鉴定结构，HPLC法测定含量，以峰面积归一化法计算，含量均大于99.0%。乙腈、甲醇(色谱纯，Merck公司)，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。　　2方法与结果　　2.1色谱条件与系统适用性试验　　色谱柱：HypersilC18柱(5μm，4.6mm×150mm);流动相:甲醇?0.2mol/L乙酸铵水溶液?冰乙酸(体积比65∶34∶1);流速1.0mL/min;柱温为

7、室温;进样量：20μL;ELSD检测器检测参数：漂移管温度110℃;载气(N2)流速2.8L/min。理论塔板数按甘草酸铵峰计算应不低于2000,在此条件下甘草皂苷G2、甘草酸铵、乌拉尔甘草皂苷B达到基线分离,且各自峰形较好，色谱图见图1。2.2对照品及供试品溶液的制备　　2.2.1对照品溶液的制备精密称取对照品甘草皂苷G23.01mg、甘草酸铵6.61mg、乌拉尔甘草皂苷B3.16mg，置同一25mL量瓶中加适量甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。实验前以0.45μm滤膜滤过，备用。　　2.2.2供试