高效液相色谱法测定补肾益气颗粒中补骨脂素和异补骨

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1、高效液相色谱法测定补肾益气颗粒中补骨脂素和异补骨【关键词】补肾益气颗粒；,,补骨脂素；,,异补骨脂素；,,高效液相色谱法　　摘要：目的建立补肾益气颗粒中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定方法。方法DiamonsilC18柱（200mm×4.6mm,5μm）,流动相为甲醇水（55∶45），流速0.85ml/min，检测波长245nm。结果补骨脂素的线性范围为0.08～0.8μg，r=0.99998(n=6)，平均加样回收率为99.69％，RSD为2.27％;异补骨脂素的线性范围为0.0796～0.796μg，r=0.99998(n=6)，平均加样回收率为100.25％

2、，RSD为2.82％。结论该法简便，准确，重现性好，可使补骨脂素和异补骨脂素达到基线分离，可以控制补肾益气颗粒的质量。　　关键词：补肾益气颗粒；补骨脂素；异补骨脂素；高效液相色谱法　　　　Abstract：ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofpsoralenandisopsoraleninBushenyiqigranules.MethodsTheDiamonsilC18（200mm×4.6mm,5μm）obilephaseconsistedofmethanol-l・min-1.TheUVd

3、etective.ResultsThelinearrangeofpsoralenethodcanbeusedtocontrolthequalityofBushenyiqigranulesple,reliableandgoodreproducibility.　　KeyonsilC18（200mm×4.6mm,5μm）；流动相为甲醇水（55∶45）；流速0.85ml・min-1；检测波长245nm。此条件下，补骨脂素和异补骨脂素可达基线分离，分离度大于1.5；理论塔板数大于2000。色谱图见图1~2。　　2.2线性关系考察分别取补骨脂素和异补骨脂素10

4、mg，精密称定，以甲醇溶解并定容于25ml容量瓶中制成混合对照品溶液（补骨脂素和异补骨脂素浓度分别为0.400，0.398mg・ml-1），以此为母液配成补骨脂素和异补骨脂素浓度分别为0.008，0.016，0.032，0.048，0.064，0.080，0.00796，0.01592，0.03184，0.04776，0.06368，0.0796mg・ml-1。分别吸取上述对照品溶液10μl，按上述色谱条件进行测定。以峰面积积分值为纵坐标Y，对照品含量为横坐标X（μg），绘制标准曲线，计算回归方程：补骨脂素：Y＝10609X－19.3

5、，r＝0.99998，线性范围为0.08～0.8μg，在此范围内线性关系良好；异补骨脂素：Y＝9793.2X－21.317，r＝0.99998，线性范围为0.0796～0.796μg，在此范围内线性关系良好。　　图1补骨脂素和异补骨脂素混合对照品色谱图（略）　　图2样品色谱图（略）　　2.3供试品溶液的制备取本品适量研匀，称取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，精密称定，密塞，称定重量，超声处理1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。　　2.4空白对照实验按本制剂的处方、工艺制成缺补骨脂的阴性制剂，按

6、上述供试品溶液制备方法及测定方法实验，结果表明其他成分对补骨脂素和异补骨脂素的测定无干扰。色谱图见图3。　　图3空白对照色谱图（略）　　2.5精密度实验吸取同一混合对照品溶液，连续进样6次，测定峰面积，结果补骨脂素RSD为0.73%，异补骨脂素RSD为0.59％。　　2.6重复性实验同一批号的样品，平行取样6份，按供试品溶液的制备方法进行制备，进样10μl，测定，结果补骨脂素平均含量为0.3060mg・g-1，RSD为1.40%；异补骨脂素平均含量为0.3071mg・g-1，RSD为2.28%。　　2.7稳定性实验　　2.7.1对照品

7、精密吸取同一混合对照品溶液10μl，分别于0，24，48h进样，测定峰面积，结果补骨脂素RSD为0.62％，异补骨脂素RSD为0.70％，表明混合对照品溶液在48h内稳定性良好。　　2.7.2供试品稳定性实验取新鲜配制的供试品溶液，分别于0，1，2，4，6，10，24h进行测定，结果补骨脂素RSD为2.76%；异补骨脂素RSD为2.31％。表明供试品溶液在24h内基本稳定。　　2.8加样回收率实验取已知含量的样品6份，分别加入补骨脂素和异补骨脂素混合对照品溶液，按制剂含量测定方法测定含量，计算加样回收率。结果见表1~2。　　2.9样品含量测定取3批样品，依法测定

8、补骨脂素和异补骨脂素含量