不同浓度bme对大鼠胚胎脊髓神经干细胞增殖和分化

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1、不同浓度BME对大鼠胚胎脊髓神经干细胞增殖和分化【关键词】神经干细胞Effectofβmercaptoethanolonproliferationanddifferentiationofneuralstemcellsfromembryonicrats　　【Abstraet】AIM:ToexploretheeffectsofdifferentconcentrationsofβMercaptoethanol(BME)inDFI2containing10mL/Lfetalco(FCS)ontheproliferationanddiffe

2、rentiationofneuralstemcellsfromratembryonicspinalcord.METHODS:Econtaining10mL/LFCStoinduceNSCsinvitro,observedthecellsinthreephases,identifiedthedifferentiationusingimmunocytochemistrybyGFAPandNSE24hlater,andanalyzedtheresults.RESULTS:Proliferationmol/Lorlmmol/L)andFC

3、SoronlybyFCS.ThedifferentiationrateofNSCstoneuronsinducedbyBME(0.5mmol/L)mol/L)significantlyincreasedto58%.ThedifferentiationrateofastrocytesinducedbyBME(0.5mmol/Lorlmmol/L)andFCSoronlybyFCSecelltoxicity.TheeffectofBMEbineduchbetterthanthatofusingonlyBMEorFCS.　　【keyer

4、captoethanol(BME);neuralstemcells;celldifferantiation　　【摘要】目的：观察含10ml/L血清的不同浓度的β一巯基乙醇(BME)对大鼠胚胎脊髓神经干细胞增殖和分化的影响.方法：从大鼠胚胎脊髓中分离神经干细胞，经过2~3次传代培养后，采用含10ml/L血清的不同浓度的BME分组对细胞进行体外诱导，选择3个时段观察细胞形态变化情况，诱导24h后采用GFAP和NSE免疫荧光染色法鉴定分化结果，同时对分化结果进行统计学分析.结果：用BME(0.5mmol/L)组和对照组血清诱导的神经元的

5、百分率分别为49%和10%，而BME(1mmol/L)组的神经元分化率显著升高至58%.由BME(0.5mmol/L)组、BME(1mmol/L)组和对照组血清诱导的星形胶质细胞分化率分别为46%，35%和83%.结论：BME有明显诱导神经干细胞向成熟神经元分化的作用.配合血清使用可使细胞向神经原分化的趋势明显优于单纯使用血清，两者协同效应明显.　　【关键词】β一巯基乙醇(BME)；神经干细胞；细胞分化　　0引言　　β巯基乙醇(βmereaptoethanol,BME)又名2巯基乙醇，是具有硫醇臭味的无色或微黄色透明液体，作为一种

6、化学原料药具有抗氧化作用.SCs)向神经元方向分化的过程中起到关键作用,陈霞平等［2］对BME诱导MSCs作用也有相关报道.MSCs在被诱导分化为成熟神经细胞的过程中必定经过神经干细胞阶段.因此，本研究将成功诱导MSCs的BME配合血清作用于神经干细胞，以观察其对神经干细胞增殖过程及分化结果的影响.　　1材料和方法　　1．1材料　　受孕SD大鼠(E10E12)由第四军医大学实验动物中心提供；DMEM/F12,N2添加剂均购自Gibco公司；EGF,bFGF购自Sigma公司，兔抗鼠NSE,GFAP,NESTIN一抗以及羊抗兔FIT

7、C,CY3荧光二抗均购自博士德公司；BME，多聚赖氨酸，胰蛋白酶均购自Sigma公司.倒置相差光学显微镜OLYMPUSIX70型.　　1．2方法　　1．2．1NSC原代培养依照EM/F12为基本培养基，N2添加剂以1∶100稀释，EGF,bFGF［5,6］终浓度为20μg/L.调整细胞密度约为9×105个/L后接种于培养瓶内，置于37℃,50ml/LCO2孵箱中培养.每隔2~3d更换新鲜培养液，5~6d传代.　　1．2．2实验分组将盖玻片放入24孔板，并用多聚赖氨酸包备37℃过夜，使用前用PBS冲洗干净.将传至第3代的神经干细胞克

8、隆球用滴管吹打成单细胞悬液，仅使用基本培养基而不加入EGF，bFGF和N2，并稀释至7.5×106个/L，接种到24孔板，每孔lmL细胞悬液.每6孔为一组，共分三个试验组(A~C组)和一个对照组(D组).A~C组分别使BME终浓度达到0.5,1和2