菊花多糖的提取分离和生物活性概述

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1、菊花多糖的提取分离和生物活性概述第一章菊花多糖的提取1材料、试剂和仪器目前，已有关于菊花多糖的提取工艺的报道主要采用了水提醇沉法[5]、超声波辅助提取法微波辅助提取法和酶辅助提取法四种方法。虽然从文献报道可知使用超声波、微波和酶辅助提取可以提高菊花多糖的得率，但由于多糖化学结构与生物活性之间的复杂关系，使用不同提取方法从同一种原植物中所得多糖不仅在分子m大小、多糖组成、糖苷键连接方式和立体结构上有较大差异，更重耍的是结构的变化会进而影响多糖的生物活性因此，根据课题组在前期研究所得的结果，表明经水提醇沉法得到的菊花粗多糖在药理活

2、性筛选中表现出了定的抗肿瘤作用。据此，本实验以原有的工作基础为背景支持，对三种菊花多糖的水提醇沉工艺进行正交试验分析，以确定最佳提取工艺，为深入开展菊花多糖的应用奠定科学依据。菊花生药材购自上海东胡庆余堂国药号有限公司，为干燥的生药饮片，原植物杭菊花产于浙江桐乡、怀菊花产于河南焦作、亳菊花产十安徽亳州，由中国药科大学李萍教授鉴定为Chrysanthemummorifoliumcv.Hangju，Chrysanthemummorifoliumcv.Huaiju禾口ChrysanthemummorifoliL微热溶解；另取酒石酸钠

3、（Na2C4H406.2H20)0.05g和五水硫酸铜0.025g，亦加蒸恼水15mL微热溶解。冷却后将上述两溶液混合，加水定容至50mL],B试剂（美国BDHChemica公司），硼砂（NaBjCVlOHzO)、乙醇、丙酮、硫酸、盐酸、氧氧化钠、问苯基苯酷和苯酹等其他试剂均为国产AR级试剂。通过水提醇沉法得到菊花水提多糖的具体方法如下：取10g干燥菊花药材，加入95%乙醇脱脂，脱脂后药材于室温下干燥。用沸水提取完全干燥后的脱脂菊花药材，常压下加热浓缩提取液，冷却后的浓缩液对流动水透析2天。对透析内液进行离心，取上清液在剧烈搅

4、拌下用95%乙醇进行沉淀，并在4C下静置过夜。离心收集沉淀，沉淀经无水乙醇和丙酮依次各洗漆两次后，置真空干燥器中50X：下干燥，得到菊花水提多糖。在需要保证采用沸水提取，4°C下乙醇沉淀过夜的条件下，设固液比（A)、提取时间（B)、提取次数（C)和醇沉倍数（D)为考察因素，以多糖的得率为评价指标，每个因素取3个水平，每个实验重复2次后取平均值。在平行操作条件下进行L9(34)正交试验。第二章菊花多糖的分离纯化1.1前言多糖类化合物的分离和纯化是糖化学研究中的难点之一，其主要原因在于：多糖属于多分散性聚合物，虽然自然界中

5、所具有的单糖种类有限，性质单一，但各单糖均存在多种可能的异构体，且在构成多糖吋可产生多种连接方式和不同的分支形式，使得多糖具有复杂的化学结构和相似的物理性质。因此目前还没有任何一种介质能满足所有糖类分离的要求，分离纯化所得到的多糖常常因为纯化介质的局限性而获得假阳性的纯多糖。而且由于糖类分子屮缺乏可进行高灵敏度检测的生色基团和焚光基团，使得目前检测多糖时多依赖于示差检测器进行检测，或者通过化学反应进行检测。在化学合成上则更显困难，目前只能制备出组成或连接较简单的寡（多）糖，但意义巨大，可以解决某些高效低产多糖在临床运用中的限制

6、。随着许多新方法和新技术的应用，科学家和工程师对多糖类化合物分离纯化的介质和方法的研究也越来越深入，极大地推动了糖化学的发展。HPGPC用Agilent1260Series高效液相系统，配置为G1312B二元菜，G1329B自动进样器，G316A柱温箱，G1362A示差检测器，G13I4F紫外可变波长检测器，AgilentChemstation控制系统和Millenium32版数据处理软件。Ultrahydrogel2000和Ultrahydrogel500串联柱（25cmx0.75cm,排阻范围分别为5X1041X6和1X1

7、01X105Da,TA(27.60g)和CMTB(25.17g)分别经4次上样（每次称取约7g样品溶于50mL去离子水，离心后取上洁液上样），依次从去离了水和不同浓度梯度的NaCl洛液洗脱液中分离得到5和4个多糖组分，所得洗脱液浓缩至小体积后对去离子水透析，透析内液经减压浓缩后进行冷冻干燥，所得次级粗多糖分别命名为CMTAO(2.73g,得率9.90%)、CMTAla(4.16g，得率15.08%)、CMTAlb(4.97g,得率17.99%)、CMTA2(4.85g,得率17.%）、CMTA3(0.81g,得率2.94%)、

8、CMTBO(18.05g，得率14.42%)、CMTBla(4.41g,得率17.54%)、CMTBlb(2.85g,得率11.31%)和CMTB2(4.28g，得率17.02%)。第三章菊花多糖的结构特征........171材料、试剂和仪器.......172多糖结构分析