反相高效液相色谱法测定冬凌草中乌索酸和齐墩果酸的

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1、反相高效液相色谱法测定冬凌草中乌索酸和齐墩果酸的【摘要】目的建立反相高效液相色谱（RPHPLC）法测定冬凌草中乌索酸和齐墩果酸的含量。方法色谱柱为NUCLEODURC18RP柱(250mm×4.6mm,5μm)；流动相为甲醇水(87∶13)；流速0.8ml·min-1，光电二极管阵列检测器，检测波长210nm，柱温25℃。结果在选定色谱条件下线性范围良好，乌索酸和齐墩果酸的样品加样回收率分别为96.2%和98.7%，RSD为1.9%和0.9%。结论该方法快速简便，结果准确可靠。【关键词】冬凌草；乌索酸；齐墩果酸；反相高效液相色谱；含量测定基金项目：国

2、家“863”计划重点资助项目　　Abstract：ObjectiveTodevelopaquantitativemethodfordeterminationofursolicacidandoleanolicacidinRabdosiarubescensbyRPHPLC.MethodsHPLCn(4.6mm×250mm,5μm)at25℃usingmethanolobilephasel·min-1anddetection.ResultsThegoodlinearrelationshipumconditions.Therecoveriesofthesta

3、ndardsaddedforursolicacidandoleanolicacidethodisrapidandprecise.　　Keyination　　冬凌草为唇形科香茶菜属植物碎米亚Rabdosiarubescens(Hemsl.)Hara的干燥全草，广布于黄河、长江流域，主产地在河南济源太行山一带。冬凌草味甘、苦，性微寒，具清热解毒，消炎止痛，健胃活血及抗肿瘤之功效［1］。用于治疗咽喉肿痛、扁桃体炎、蛇虫咬伤及食管癌、贲门癌、肝癌、乳腺癌等。临床实验证明冬凌草对食管癌、贲门癌、肝癌等有一定疗效，对食管上皮增生有显著疗效［2］。1991年我国卫生部

4、批准将其干燥叶及地上部分作为中药材，收入部颁中药材标准。冬凌草中的主要有效成分为冬凌草甲素、冬凌草乙素、乌索酸和齐墩果酸。近年药理研究表明,不仅冬凌草甲乙素具有很强的抗癌作用,乌索酸和齐墩果酸也具有一定的抗肿瘤活性［3～5］。笔者采用反相高效液相色谱法同时测定了不同产地冬凌草中乌索酸和齐墩果酸的含量，为控制药材质量提供依据。　　1仪器与材料　　posl.)Hara的干燥叶和地上部分。　　2方法与结果　　2.1溶液的制备　　2.1.1对照品混合溶液的配制精密称取乌索酸和齐墩果酸对照品3.22mg和1.28mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇

5、匀，配制成对照品混合溶液，备用。　　2.1.2样品溶液的配制取冬凌草样品于60℃恒温干燥8h，粉碎，精密称取约3g，加入95%乙醇溶液40ml，超声提取120min，冷却至室温，滤过，滤渣洗涤2次，合并滤液于50ml容量瓶中，乙醇定容，摇匀，经0.45μm微孔滤膜过滤，得样品溶液。　　2.2检测波长的确定取乌索酸和齐墩果酸对照品混合溶液进样，在190～500nm波长范围进行光谱扫描，其在流动相中的最大吸收波长均为203.4nm(图1)，但由于流动相在短波长处有末端吸收，为了减少干扰，提高信噪比，提取不同波长的色谱图进行比较，选择210nm为检测波长信噪比

6、高，峰形好，基线平稳［6］。　　2.3色谱条件色谱柱为NUCLEODURC18RP柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为甲醇水（87∶13，V/V）；流速0.8ml·min-1；检测波长210nm；柱温25°C，进样量10μl。乌索酸和齐墩果酸理论塔板数均大于10000，分离度大于1.5。乌索酸和齐墩果酸对照品混合溶液及冬凌草样品溶液的HPLC色谱见图1。　　图1乌索酸和齐墩果酸对照品紫外光谱（略）　　2.4线性关系实验分别精密吸取对照品混合溶液1.0，5.0，10.0，15.0，20.0μl，按选定的色谱条件进样并测定峰面积。以峰面积（μV·

7、s）对进样量（μg）进行线性回归，乌索酸和齐墩果酸的回归方程分别为：　　YUA=1.12×105X+3.68×103，r=0.9996，　　YOLA=1.35×105X+2.11×103，r=0.9995　　表明当乌索酸进样量在0.0644～1.288μg，齐墩果酸进样量在0.0256～0.512μg时，线性关系良好。　　2.5仪器精密度实验精密吸取乌索酸和齐墩果酸对照品混合溶液10μl进样，重复5次，测得乌索酸峰面积的相对标准偏差（RSD）为0.6%（n=5），齐墩果酸的峰面积RSD为0.9%（n=5），表明仪器精密度良好。　　2.6方法重现性实验精密

8、称取冬凌草样品5份，按上述方法配制样品溶液，精密吸取10μl进样分析，测得乌索酸