反相高效液相色谱法同时测定马鞭草中乌索酸和齐墩果酸的含量论文

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1、反相高效液相色谱法同时测定马鞭草中乌索酸和齐墩果酸的含量论文【摘要】目的建立RP-HPLC法测定马鞭草中乌索酸和齐墩果酸的含量。方法色谱柱为NucleosilC18柱（4.6mm×250mm,5μm），流动相为甲醇-水(88∶12,V/V)，流速为0.8ml/min，检测波长为210nm，柱温25℃。结果乌索酸在0.458～4.109μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9997)，平均回收率为98.1%，RSD=1.1%；齐墩果酸在0.156～1.389μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9996)，平均回收率为101.7%.freelet

2、hodfordeterminingursolicacidandoleanolicacidinVerbenaofficinalisL.byhighperformanceliquidchromatography.MethodsTheseparationn(4.6mm×250mm,5μm)ethanol-obilephase.Theflol/minandthedetection.Thecolumnethodisrapid,simple,accurateandreliableandcanbeusedforthequalitycontrolofVer

3、benaofficinalisL.．Keypom×250mm,5μl,带保护柱)；流动相为甲醇-水（88∶12，V/V）；流速为0.8ml/min；柱温为25℃；检测波长为210nm；以《美国药典》方法计算，乌索酸和齐墩果酸理论塔板数均大于10000。乌索酸和齐墩果酸对照品及马鞭草样品的HPLC色谱见图1。2.2对照品溶液的配制精密称取干燥至恒重的乌索酸对照品22.8mg和齐墩果酸对照品7.8mg，置于10ml容量瓶中，加入适量甲醇溶解，用甲醇定容，得对照品储备液。精密吸取1ml混合液置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，混合均匀，制成乌索

4、酸和齐墩果酸的浓度分别为0.228μg/μl和0.078μg/μl对照品混合溶液，备用。2.3样品溶液的制备将马鞭草样品置烘箱中85℃烘干12h，研细后精密称取约4g，置于具塞三角烧瓶中，加入10倍量95%乙醇，采用超声法提取60min，过滤，药渣洗涤两次，合并滤液于50ml容量瓶中，加乙醇定容至刻度，摇匀。滤液用0.2μm的滤膜过滤，得马鞭草提取物的样品溶液。2.4线性关系实验分别精密吸取对照品的混合溶液2.0，6.0，10.0，14.0，18.0μl进样分析，按选定的色谱条件进样并测定峰面积。以峰面积（μV·s）对进样量(μg)进行线性

5、回归，乌索酸和齐墩果酸的回归线方程分别为：YUA=5.18×105X-4.36×104（r=0.9997）YOLA=6.21×105X-6.32×104（r=0.9996）表明当乌索酸进样量在0.458～4.109μg，齐墩果酸进样量在0.156～1.389μg范围内线性关系良好。2.5精密度实验精密吸取对照品混合溶液10μl，重复进样5次，分别测定峰面积值，计算出乌索酸的RSD为0.9%，齐墩果酸的RSD为0.7%，进样方法和仪器精密度良好。2.6重复性实验取干燥至恒重的同一批马鞭草样品5份，按样品溶液制备方法制备样品溶液。精密吸取10μ

6、l进样分析，乌索酸RSD为2.1%，齐墩果酸峰面积RSD为2.3%。2.7加样回收率实验精密称取干燥至恒重、已知乌索酸和齐墩果酸含量的马鞭草样品5份，每份约4g，加入适量乌索酸和齐墩果酸对照品适量，5份样品同时按样品溶液制备方法提取，进样分析。乌索酸平均回收率为98.1%，RSD1.1%，齐墩果酸平均回收率为101.7%，RSD1.7%。2.8样品的含量测定精密吸取马鞭草样品溶液10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，外标法计算样品中乌索酸和齐墩果酸的含量。结果见表1。表1马鞭草提取物中乌索酸和齐墩果酸含量（略）3讨论3.1提取方法从

7、中草药中提取有效成分的常规方法主要有：热回流法、索氏法、煎煮法及渗滤法、冷热浸泡法等［4］。本文采用的超声提取法在提取过程中具有破坏植物药材细胞的作用，加速溶媒渗透到药材细胞中，使药材的化学成分易溶于溶媒中［5］。它与常规提取方法相比，具有提取时间短，产率高，降低溶剂消耗，节约能源的优点。3.2提取时间样品加入10倍量95%乙醇溶液，分别超声提取45，60，90，120，150min，预处理后测定提取液中乌索酸含量，60min后乌索酸含量无明显变化，表明其成分提取完全，乌索酸平均加样回收率为98.1%，齐墩果酸的平均加样回收率为101.7%

8、。3.3检测波长取乌索酸和齐墩果酸对照品溶液进样，在190～500nm波长范围进行光谱扫描，乌索酸和齐墩果酸在流动相中的最大紫外吸收波长均为204.5nm（图2），但由于流动相在