rorα在低氧环境下对角质形成细胞分化及存活的调控作用

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1、RORα在低氧环境下对角质形成细胞分化及存活的调控作用Theretinoicacidreceptor-relatedorphanreceptorRORαregulatesdifferentiationandsurvivalofkeratinocytesduringhypoxia学科专业：微生物与生化药学研究生：李洪玉指导教师：代军副教授天津大学药物科学与技术学院二零一七年五月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得天津大学或其他教育

2、机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津大学有关保留、使用学位论文的规定。特授权天津大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。（保密的学位论文在解密后适用本授权说明）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年日摘要在表皮低氧压力的微环境中，低氧可通过影响低氧诱导因子（hypoxi

3、ainduciblefactors,HIFs）依赖基因的表达来影响角质形成细胞的分化和表皮屏障功能的形成。维甲酸相关的孤儿核受体（Retinoid-relatedorphanreceptor,ROR）作为类固醇核激素受体超家族的成员，广泛分布在机体的各个组织中。目前有研究发现，低氧可以在不同组织中上调RORA基因的转录，但是在皮肤中还尚未发现此类报道，同时在皮肤低氧环境下，ROR对角质细胞分化与表皮屏障功能的影响及分子机制也尚不明确。目的：本研究将重点探究在低氧条件下，ROR与HIF-1在角质形成细胞中的相互作用关系，从而为表皮屏障功能障碍类疾病的治疗提供新

4、的靶点。方法：1.体外培养人永生化角质细胞HaCat和小鼠永生化角质细胞PAM212，通过Real-timePCR和Westernblotting检测低氧对ROR和相关分化标志基因表达的影响。2.通过siRNA瞬时沉默ROR、HIF-1的表达，或shRNA构建ROR沉默的稳定细胞系，确定低氧条件下ROR对角质细胞分化的影响。3.利用Caspase3/7活性分析方法、对凋亡标志PARP蛋白的检测和流式细胞技术，分析ROR在低氧时对角质细胞存活的影响。4.利用ROR沉默或ROR高表达的稳定细胞系，采用Westernblotting、Luciferaseas

5、say和细胞免疫荧光技术，分析低氧时ROR在角质细胞中对HIF-1蛋白表达的影响，进一步确定作用机制。结果：1.在人角质形成细胞和小鼠角质细胞中，低氧可以诱导ROR的高表达，同时促进角质细胞的分化。2.干扰ROR或HIF-1的表达会阻碍角质细胞的分化。3.HIF-1A基因沉默下调ROR的表达，说明HIF-1可能作为ROR的上游调控者影响角质细胞的分化。4.在角质形成细胞中，ROR的升高可以抑制低氧引发的细胞凋亡，形成促存活的保护作用。5.在角质细胞中，低氧诱导的ROR可增加HIF-1蛋白的稳定性并促进其在细胞核中的积累，进而增强HIF-1A的转录

6、活性。结论：综上所述，我们揭示低氧诱导的ROR通过稳定HIF-1蛋白的表达、促进HIF-1蛋白在细胞核中的积累，进而增强其转录活性调节相关基因的表达，最终保护角质形成细胞的存活并促进角质细胞的存活和晚期分化，从而保证表皮屏障功能的形成。关键词：低氧，ROR，HIF-1，角质形成细胞，分化，凋亡IABSTRACTLowO2pressurespresentinthemicroenvironmentofepidermiscontrolkeratinocytedifferentiationandepidermalbarrierfunctionthroughhypox

7、iainduciblefactors(HIFs)dependentgeneexpression.Theretinoicacidreceptor-relatedorphanreceptoralpha(RORα)belongstothesteroidnuclearhormonereceptorsuperfamilyandiswidelyexpressedinavarietyoftissues.CurrentresearchhasfoundthatthetranscriptionofRORAgenecouldbeup-regulatedbyhypoxiai