三氧化二砷对肝癌hepg2细胞增殖的影响

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1、三氧化二砷对肝癌HepG2细胞增殖的影响　　摘要:目的研究三氧化二砷（As2O3）对肝癌细胞的增殖抑制作用.方法应用台盼蓝拒染法、MTT比色法及细胞克隆形成试验，研究As2O3对肝癌HepG2细胞的增殖抑制和细胞毒作用.结果As2O3能显著抑制肝癌细胞的生长，5μmol・L-1As2O3抑制程度明显强于1μmol・L-1.5和1μmol・L-1As2O3作用后细胞克隆形成率分别为（1.5±1.2）%和（12.3±2.2）%，明显低于对照组的（30.0±4.2

2、）%（P<0.01）.As2O3对肝癌细胞有较强的细胞毒作用，且呈明显剂量和时间依赖性，其对肝癌细胞的杀伤率高于5-氟脲嘧啶（5-FU）和丝裂霉素（MMC），但无显著性差异，As2O3与5-FU及MMC存在协同效应，联合应用杀伤率明显升高.结论As2O3具有明显的抑制肝癌细胞增殖作用，有必要进一步探讨其对肝癌的治疗价值.　　Key;arsenicals/TU　　Abstract:AIMToexploretheinhibitiveeffectofarsenictrioxide（As2O3）ont

3、heproliferationofhumanlivercancercellline-HepG2.METHODSThemorphologicchanges，proliferationability，colony-formingrateofHepG2treatedbyAs2O3icroscopy，groingassay.ThecytotoxicityofAs2O3onHepG2inedbyMTTassay.RESULTSColony-formingrateofHepG2ol・L-1As2O

4、3（1.5±1.2）%ol・L-1As2O3（12.3±2.2）%，P<0.01andmuchloark-ablecytotoxiceffectonHepG2andcytotoxiceffectedependent.Thecytotoxiceffectmol・L-1，应用时用RPMI1640培养液稀释，4℃保存.肝癌细胞株HepG2由军事医学科学院分子病毒学研究所提供，RPMI1640培养液、小牛血清、台盼蓝、四甲基偶氮唑蓝（MMT）及二甲基亚砜（DMSO）均购于华

5、美公司.1.2方法　　1.2.1As2O3对肝癌细胞生长曲线的影响　　取对数生长期的肝癌细胞5×104置于54个25mL的培养瓶中，待细胞贴壁后，实验组加入1μmol・L-1和5μmol・L-1的As2O3，对照组加等体积的培养液，连续培养6d，每日各取3瓶，以台盼蓝拒染法计算活细胞数，取平均值，绘制生长曲线.　　1.2.2As2O3对肝癌细胞克隆形成的影响　　取对数生长期肝癌细胞，采用有限稀释法，以每孔100个细胞接种于6孔培养板中，实验组分别加入1μmolӥ

6、9;L-1和5μmol・L-1As2O3，对照组加等体积的培养液，每个浓度设4个复孔，静止连续培养2ol・L-1As2O3，对照孔加等体积的培养液，每个浓度设4个复孔，分别培养24，48和72h，每孔加入5g・L-1MTT10μL，再培养4h，弃去上清液，加入DMSO100μL，振荡15min，在酶联仪570nm处测吸光度A值.杀伤率按以下公式计算.杀伤率（%）=（对照孔A值-实验孔A值）/对照孔A值×100%.　　1.2.4As2O3与5-FU，MMC对肝

7、癌细胞的细胞毒作用比较　　采用MTT比色法，将对数生长期肝癌细胞1×104接种于96孔培养板，待细胞贴壁后，实验组分别加入As2O32μmol・L-1，5-FU0.5g・L-1，MMC4mg・L-1，As2O32μmol・L-1+5-FU0.5g・L-1，As2O32μmol・L-1+MMC4mg・L-1，对照组加等体积培养液，按前述方法测吸光度A值，计算杀伤率.　　2结果　　2.1As2O3对肝癌细胞

8、生长的影响　　1μmol・L-1和5μmol・L-1均能明显抑制肝癌细胞的生长，随着药物浓度的增加，作用时间延长，抑制作用更明显，各浓度组和对照组之间活细胞数比较差异非常显著（P<0.01，Fig1）.3对肝癌细胞克隆形成的影响1μmol・L-1和5μmol・L-1As2O3均能明显抑制肝癌细胞的克隆形成，克隆形成率分别为（12.3±2.2）%和（1.5±1.2）%，5μmol・L-1组的抑制