当归补血汤对荷瘤小鼠化疗后免疫功能的影响

当归补血汤对荷瘤小鼠化疗后免疫功能的影响

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1、当归补血汤对荷瘤小鼠化疗后免疫功能的影响作者:陈鹊汀,刘智勤,朱惠学,王海波,李中【摘要】目的观察当归补血汤对环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)化疗荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法建立S180荷瘤小鼠模型后,随机分为4组,荷瘤对照组、CTX组、当归补血汤+CTX组及当归补血汤组。造模次日开始给药,共10d,停药次日处死,测定脾脏和胸腺指数、腹腔巨噬细胞吞噬功能、NK细胞活性、T淋巴细胞增殖能力。结果当归补血汤可提高化疗荷瘤小鼠脾脏和胸腺指数、腹腔巨噬细胞吞噬功能和NK细胞活性,同时还对刀豆素A(ConA)诱导的T淋巴细胞增殖有促进作用

2、。结论当归补血汤具有提高机体免疫功能,抵御化疗所引起的免疫功能下降的作用。【关键词】当归补血汤;肿瘤;免疫功能;化疗当归补血汤方出自李东垣《内外伤辩惑论·暑伤胃气论》,为气血双补之经典名方。研究表明,此方具有增强免疫的效果[1]。但有关当归补血汤对化疗荷瘤小鼠免疫系统的影响报道较少,我们通过建立S180荷瘤小鼠模型,观察了当归补血汤对环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)化疗荷瘤小鼠免疫功能的影响,旨在为该方的临床应用提供一定实验依据。  1材料与仪器  1.1动物及细胞株  清洁级昆明小鼠,7~9周龄,雌雄各半,体质量18~22g,

3、由河北医科大学实验动物中心提供,许可证:SCXK(冀)2003-1-003。动物在实验前适应性驯养1周。饲料和垫料由河北医科大学实验动物中心提供。实验期间自由采食饮水。腹水型S180瘤株由河北医科大学实验动物中心提供,L929细胞株由北京市中医研究所提供。  1.2药品   当归补血汤由黄芪和当归组成(饮片由河北大学附属医院中药房提供,所有药品均经中药专家鉴定),将上述药物加水浸泡20min后,煎煮3次,约30min/次,3煎溶液混合过滤,取汁300ml,离心取上清,80℃水浴浓缩至每毫升含生药1.2g,分装,高温消毒后置于4℃冰箱保存备用。化疗药

4、物:注射用环磷酰胺,江苏恒瑞医药股份有限公司(批号:06112021)。  1.3试剂及仪器  DMSO(Amresco公司产品),四氮甲唑蓝(MTT,Amresco公司产品),刀豆蛋白A(ConA,Sigma公司产品),RPMI-1640完全培养基(Amresco公司产品)。酶标分析仪(北京普朗新技术有限公司产品),CO2培养箱(上海福玛实验设备有限公司产品),超净工作台(苏净集团,苏州安泰空气技术有限公司产品),倒置显微镜(南京江南永新光学有限公司产品)。  2方法  2.1动物模型的建立[2]  无菌条件下抽取6~7d生长良好的S180小鼠的

5、腹水,按1∶3比例用生理盐水稀释,反复冲打,充分混匀,在显微镜下计数,用生理盐水调整细胞浓度为1.5×107/ml,取0.2ml于每只小鼠右侧腋窝下碘酊消毒后皮下接种。瘤株接种前,均用0.2%台盼蓝染色,计算活细胞数为95%~98%。从抽取腹水时开始,到移植完最后1只小鼠的总时间控制在1h内。  2.2分组及给药  小鼠接种24h后按体质量和性别随机分成荷瘤对照组、CTX组、当归补血汤+CTX组和当归补血汤组。荷瘤对照组均用生理盐水灌胃,同时腹腔注射生理盐水,单纯化疗组腹腔注射CTX0.02g·kg-1·d-1,同时用生理盐水灌胃,当归补血汤+CT

6、X组腹腔注射CTX0.02g·kg-1·d-1,同时用当归补血汤12g·kg-1·d-1(按生药量计算,剂量由预实验得出)灌胃,当归补血汤组用当归补血汤12g·kg-1·d-1灌胃,同时腹腔注射生理盐水,各组灌胃容积均为0.4ml/只,腹腔注射容积均为0.2ml/只,各组于瘤细胞接种第2日开始用药,1次/d,连续10d。  2.3脾脏、胸腺指数  小鼠脱臼处死,以无菌操作取下脾脏、胸腺,电子天平称质量并计算脏器指数。  2.4腹腔巨噬细胞吞噬功能的测定[3]  小鼠脱臼处死,75%酒精中浸泡2min,置超净台。每只小鼠腹腔注射冷PBS液10ml,轻

7、揉腹部2min,回抽腹腔液,离心弃上清。RPM1-1640培养液洗两次,计数并调节细胞浓度为2×106个/ml,加入96孔培养板,每孔100μl,每样本均设3个复孔。37℃,5%CO2培养箱培养4h,温PBS液洗并吸出未贴壁细胞,得到巨噬细胞单层。于每孔中加入0.03%的中性红溶液100μl,置CO2培养箱培养1h,用温PBS液反复冲洗未被吞噬的中性红3次。于每孔中加入细胞裂解液(1∶1的冰醋酸和无水乙醇)100μl,4℃静置过夜,用酶标仪在570nm处测定OD值。  2.5NK细胞活性测定[4]  无菌摘取脾脏,按常规制备脾细胞悬液,用含10%小

8、牛血清的RPMI-1640培养液配成1×107/ml浓度作为效应细胞。取传代培养的L929细胞,用0.25%胰酶消化液消化

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