蛋白激酶c在大鼠重症急性胰腺炎中的表达

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1、蛋白激酶C在大鼠重症急性胰腺炎中的表达作者：王斌生,曹农,柴琛,俞永江,武光【摘要】目的:探讨蛋白激酶C(PKC)家族成员PKCα和PKCδ在重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺及肺脏中的动态表达情况和组织病理改变的关系.方法：胰胆管逆行注射牛黄胆酸钠制成大鼠SAP模型，观察胰腺及肺脏病理学变化，采用免疫组织化学方法分别检测PKCα，PKCδ在SAP大鼠胰腺和肺脏中的表达情况,并进行对比分析.采用逆转录多聚酶链反应（RTPCR）检测96只大鼠胰腺组织中PKCmRNA的表达情况.结果：建模后1，6，12和24h假手术（SO）组胰腺中PKCα表达分别为0.70±0.0

2、4，0.71±0.05，0.75±0.04和0.71±0.07；SAP组分别为0.83±0.05,0.95±0.09,1.10±0.10和1.08±0.16，两组各时间点之间差异均有统计学意义（P<0.01）.轻型急性胰腺炎（MAP）组大鼠建模后胰腺中PKCα表达分别为0.73±0.04,0.73±0.03,0.85±0.08和0.84±0.06，与SO组各时间点相比，在12h和24h差异具有统计学意义（P<0.05），与PKCα相类似，PKCδ的表达在1h开始增高，12h达到高峰，且维持时间较长.MAP组PKCδ在12h达到高峰，但维持时间较短，24

3、h时有所减低.结论：PKCα在SAP的病程发展中起重要作用.监测PKCα水平可为SAP的早期诊断提供帮助.【关键词】胰腺炎;信号传导;蛋白激酶C;逆转录聚合酶链反应　　0引言　　近年来,重症急性胰腺炎（severeacutepancreatitis,SAP)的研究多集中在炎症因子通过信号传导引发全身炎性反应综合征(systemicinflammatoryresponsesyndrome,SIRS),并渐进发展成为多器官功能障碍综合征(multipleorgandysfunctionsyndrame,MODS)上，但对于SAP的早期诊断仍缺乏特异性指标.已有研究［1

4、-2］证实蛋白激酶C(protEinkinaseC,PKC)可调控多种促炎因子（IL1,IL12,TNF和NFΚB等）的活化，测定血清IL12水平能预测SAP的预后，对其早期诊断具有重要意义［3］.我们采用免疫组织化学法和RTPCR法测定PKC在SAP中的表达水平，以探讨PKC在SAP中的作用机制，为临床诊治SAP提供依据.　　1材料和方法　　1.1材料清洁级SD大鼠96只（雌雄各半），体质量220～260g，（甘肃省中医学院实验动物中心），实验前12h禁食，自由饮水.牛黄胆酸钠(美国Sigma公司)；一步法总RNA提取试剂Trizol(美国Invitr

5、ogen公司)；一步法反转录聚合酶链式反应(RTPCR)试剂盒（大连宝生物公司）；即用型SABC免疫组化染色试剂盒，兔抗PKCα，鼠抗PKCδ和DAB显色试剂盒(武汉博士德公司).　　1.2方法　　1.2.1实验分组96只SD大鼠随机分为假手术(shamoperation，SO)组、轻型急性胰腺炎（mildacutepancreatitis，MAP）组和SAP组，每组动物32只.　　1.2.2模型制作MAP组大鼠术前禁食12h，自由饮水,戊巴比妥钠30mg/kg腹腔麻醉,无菌条件下上腹正中切口进腹,于十二指肠内侧见片状分布的胰腺,肝门部胆胰管用无损伤动脉夹夹闭,

6、从胆胰管开口十二指肠系膜缘对侧肠壁穿刺插入导管,导管进入肠腔后对准膨大壶腹中心插入胆胰管约1cm,用微量泵以0.1mL/min速度推注20mL/L牛磺胆酸钠1mL/kg,推注完毕后无损伤动脉夹夹闭胰胆管壶腹部观察10min后拔管,去除动脉夹,缝合十二指肠穿刺口并关腹.SAP组用微量泵以0.1mL/min速度推注50mL/L牛磺胆酸钠1mL/kg,其余步骤同MAP组.SO组开腹仅轻轻翻动胰腺，关腹后皮下注射40mL/kg生理盐水.　　1.2.3取材和评分各组动物在建模后于1，6，12和24h四个时间点，（各时间点8只动物）以戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，经原切口入腹，无菌

7、条件下取胰腺和肺脏，分别保存于40g/L甲醛及-80℃冰箱，按　　2结果　　2.1大鼠胰腺和肺脏组织中PKC阳性细胞的表达SO组中可偶见PKCα和PKCδ阳性细胞，且主要在细胞浆中表达.MAP组PKCα和PKCδ阳性细胞在胰腺和肺泡胞浆及胞膜中均有表达.SAP组PKCα和PKCδ在胰腺及肺泡细胞膜中表达均呈强阳性.SAP组1，6，12和24h四个时间点PKCα表达分别为766.00±9.79，799.13±12.80，821.38±15.81和816.13±24.48；PKCδ表达分别为747.14±10.23，775.91±14.30，797.50±11.32和

8、794.3