反相高效液相色谱法测定地榆中金丝桃苷的含量

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1、反相高效液相色谱法测定地榆中金丝桃苷的含量【摘要】　　目的建立地榆中金丝桃苷的高效液相色谱含量测定方法。方法采用RP-HPLC测定，C18柱，流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液（46∶54），用三乙胺调pH至3.0，流速1.0ml·min-1，检测波长370nm；供试品溶液的制备采用甲醇超声提取。结果测定了不同产地不同批次的地榆药材，金丝桃苷质量分数在0.052%～0.291%。结论该方法灵敏快速，准确可靠，可用于地榆的质量控制。【关键词】地榆金丝桃苷反相高效液相色谱法　　　Abstract:Obj

2、ectiveToestablishadeterminationmethodofhyperosideinSanguisorbaofficinalis.MethodsRP-HPLCanalyticalmethodnobilephase,theflol·min-1,andthedetection.Themethodofsample0.052～0.291%indifferentgroupsofS.officinaliscollectedfromthedifferentlocations.Conclusi

3、onThemethodisaccurateandcanbeusedforthequalityofSanguisorbaofficinalis.　　Keyg，置量瓶中，加甲醇定容至25ml，其金丝桃苷含量为0.53mg·ml-1。再精密吸取金丝桃苷对照品溶液2.0ml，加甲醇定容至50ml量瓶中，其金丝桃苷含量为0.0212mg·ml-1。　　2.2供试品溶液的制备　　取地榆干燥药材或饮片的粉末（过100目）1g，分别精密称定，至具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100ml，称定重量，超声提取1h，放冷，

4、再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，用续滤液作为供试品溶液。　　2.3色谱条件　　HypersilODS2分析柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相甲醇-0.2%磷酸溶液（46：54），用三乙胺调pH至3.0；流速1.0ml·min-1；检测波长370nm；柱温25℃；进样量10μl；在选定的色谱条件下，理论塔板数以金丝桃苷峰计算不低于3000。分离度大于1.5，拖尾因子在0.95～1.05。色谱图见图1。　　2.4检测波长的选择　　取金丝桃苷对照品适量，用

5、甲醇溶解后作紫外全波长扫描，λ286，370nm,因286nm下非黄酮物质也有吸收，为避免干扰，选择检测波长为370nm。　　2.5线性关系的考察　　分别精密吸取0.0212mg·ml-1的金丝桃苷对照品溶液2，4，6，8，10，12，16μl注入液相色谱仪，测定峰面积，以金丝桃苷含量（X）为横坐标，其峰面积吸收度积分值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：Y=2263.9X+2.9635，r=0.9998（n=7），表明金丝桃苷在0.04～0.34μg线性关系良好。　　2.6精密度实验　

6、　精密吸取0.0212mg·ml-1金丝桃苷对照品溶液10μl，连续进样5次，测得峰面积积分值RSD为0.86%，表明精密度良好。　　2.7重复性实验　　精密称取同一样品粉末1g（5份），按供试品溶液的制备方法制备，进样10μl，测得金丝桃苷含量的RSD为0.99%，表明该方法的重复性好。　　2.8稳定性实验同一供试品溶液，从制备完毕开始放置，分别于0，2，4，6，8，10h进样检测，其峰面积积分值RSD为1.9%。表明供试品溶液在10h内比较稳定。　　2.9加样回收率实验　　取已知含量的药材（

7、6号含量1.60mg·g-1）样品6份，每份0.50g，精密称定，计算样品中金丝桃苷量，分别加入适量的金丝桃苷对照品，按样品制备方法和测试条件进行测定，计算加样回收率。结果见表1。表1地榆中金丝桃苷的加样回收率（略）　　2.10样品测定　　分别精密吸取各样品10μl进样测定，计算含量，结果见表2。表2不同产地地榆样品的金丝桃苷含量（略）　　3讨论　　3.1提取条件的选择　　根据金丝桃苷的溶解性能，选择乙醇、甲醇、醋酸乙酯作为提取溶剂，比较了3种提取溶剂提取方法（超声、回流及索氏提取）和不同提取时

8、间（0.5，1.0，1.5h）对提取效果的影响。结果显示采用超声提取方法的提取率最高，甲醇提取效果最好，含量结果表明超声提取1.0h可使待测成分提取完全。实验证实，含量并未随着提取时间延长而有所增加，超过1h时含量甚至有下降的趋势。　　3.2流动相的选择　　由于金丝桃苷为黄酮类化合物，本实验采用甲醇和0.2%磷酸溶液的二元流动相体系，但实验中发现色谱峰有拖尾现象。经反复实验发现，在1000ml的0.2%磷酸溶液中加入1.8ml三乙胺时的分离效果最佳，经多次，多批样品测试，系统具有良好的重复性和稳