非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变检测及其与临床病理特征的关系

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1、非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变检测及其与临床病理特征的关系丁毅张海萍钟山付莉白冬雨张海芳厦门大学附属第一医院病理科，福建厦门361003[摘要]目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）表皮生长因子受体（EGFR）基因突变情况及其与临床病理的关系。方法对2010年1月—2014年1月来该院诊治的159份非小细胞肺癌手术切除标本进行分析，实验中采用基因测序方法对标本中的EGFR基因突变情况进行检测，分析其与临床病理的关系。结果159例样本中，EGFR基因突变检出率12.6%(20/159)，突变主要集中在19号外显子的缺失和21号外显子的点突变。女性患者基因突变检出率明显高于男性

2、患者（P﹤0.01）。腺癌及细支气管肺泡癌患者基因突变检出率明显高于其他组织学分型（P﹤0.01）。高分化患者基因突变检出率高于中-低分化检出率（P＜0.05）。EGFR基因突变与年龄及淋巴结转移与否无关（P＞0.05）。结论非小细胞肺癌患者EGFR基因突变与性别、组织学分型及分化程度密切相关。.jyqkalgroallcelllungcancer，NSCLC）中表达上调，参与细胞增殖、血管生成、抵抗凋亡和肿瘤侵袭，在肿瘤形成和介导瘤细胞的生物行为上发挥着重要作用，是目前NSCLC治疗的重要靶点之一[1]。该研究就此主要研究非小细胞肺癌EGFR基因突变情况及其与临床病理的关系

3、，旨在为临床治疗提供靶点依据，现对2010年1月—2014年1月间来该院诊治的159份非小细胞肺癌手术切除标本进行分析，报道如下。1资料与方法1.1一般资料选取厦门大学附属第一医院病理科收集的159份NSCLC手术切除标本为研究对象，术前都未接受放化疗治疗。其中男性117例，女性42例，年龄范围36~78岁，平均59岁，中位年龄61岁。按中位年龄分两组（4例无年龄纪录）：≤60岁77例，＞60岁78例。组织学分型：腺癌63例，细支气管肺泡癌16例，非腺癌80例（包括鳞癌53例、腺鳞癌10例、大细胞癌11例、黏液表皮样癌2例、肉瘤样癌4例）。1.2方法①DNA提取。取蜡块肿瘤组

4、织切片，厚度为5~6μm，5~10片，保存在无菌专业管（1.5mL）中。把二甲苯脱蜡(鞍山市华昊化工厂)、乙醇洗脱二甲苯(青岛新锐化学有限公司)（均由厦门大学附属第一医院专业医师配置）加入管中，随后将其晾干。再向每一根管中加入300μL的裂解液及30μL的蛋白酶K，水浴（55℃）3h。100℃下灭活蛋白酶K5至10min。然后每一根管中加入120μL的饱和氯化钠，均匀振荡20s，离心处上清，之后加入双倍体积的乙醇（无水），零下20℃沉淀2h。4℃离心20min，速度为12000r/min，弃上清；加入一定量的乙醇（80%，冷），离心，真空抽干。最后利用紫外分光光度仪测量并保持

5、样本DNA纯度为1.7~2.0之间。②PCR扩增。PCR反应条件：仪器设备为PCR扩增仪（美国ABI-2700型），先95℃预变性，退火1min，延伸1min，循环10次，变性50s，再分别退火、延伸1min，循环30次，72摄氏度延伸10min。回收并利用DNA纯化试剂盒测量PCR产物凝胶电泳特异性条带。③测序。运行PCR程序，利用乙醇纯化产物，用测序仪（美国ABI3730型）测序纯化后的产物。所得结果与基因库EGFR基因序列核对，所有病例均经正向及反向测序。1.3统计方法应用SPSS16.0统计学软件对EGFR基因突变检测数据进行分析，计数资料用率表示，采用χ2检验。2结

6、果2.1EGFR基因突变情况分析159例NSCLC组织标本中EGFR基因突变20例（12.6%），突变主要集中在19号外显子的缺失和21号外显子的点突变（90.5%），其中20号外显子S768I、21号外显子L861Q突变同在1例（0.6%）。见表1。2.2EGFR基因突变与临床病理关系分析在159例NSCLC患者中，女性患者EGFR基因突变率（31.0%，13/42）高于男性患者（6.0%，7/117），两者差异有统计学意义（χ2=17.52，P＜0.01）。腺癌和细支气管肺泡癌患者EGFR基因突变率（19%，12/63和37.5%，6/16）高于非腺癌患者（2.5%，2/

7、80），差异有统计学意义（χ2=21.38，P＜0.01）；细支气管肺泡癌患者EGFR基因突变率（37.5%，6/16）高于腺癌患者（19%，12/63），但两者差异无统计学意义（χ2=10.93，P＞0.05）。高分化患者EGFR基因突变率（30.0%，6/20）高于中-低分化患者（10.1%，14/139），两者差异有统计学意义（χ2=6.31，P＜0.05）。EGFR基因突变率与年龄及淋巴结转移与否无关，差异无统计学意义（χ2=0.72，P＞0.05）。见表2。3讨论肺癌是严重危害人类健康的常见恶